Staphylococcus aureus leucidine, composizioni terapeutiche e loro usi

Il ruolo obbligatorio delle cellule endoteliali nel rilassamento della muscolatura liscia arteriosa da parte dell’acetilcolina.Nonostante il suo potente effetto vasodilatatore in vivo, l’acetilcolina (ACh) non provoca sempre il rilassamento di  preparati di vasi sanguigni isolati in vitro. Ad esempio, nella cintura a spirale dell’aorta discendente  del coniglio   , l’unica risposta registrata all’ACh sono state le contrazioni graduali, che si verificano a concentrazioni superiori a 0,1 µM e mediate dai recettori muscarinici.

Abbiamo recentemente osservato che nella  preparazione dell’anello dell’aorta toracica di coniglio   , ACh ha causato un rilassamento significativo a concentrazioni inferiori a quelle richieste per indurre la contrazione (conferma dal precedente rapporto di Jelliffe).

Esaminando questa apparente discrepanza, abbiamo scoperto che la perdita di rilassamento di ACh per la striscia era il risultato di sfregamento inavvertitamente della sua superficie interna contro superfici estranee durante la sua preparazione.Se è stata prestata attenzione per evitare lo sfregamento della superficie intimale durante la preparazione, il tessuto, sia esso un anello, una striscia trasversale o una striscia a spirale, mostrava sempre rilassamento con ACh e la possibilità che le cellule endoteliali fossero rimosse per attrito della superficie intimale era considerato  .

Mostriamo qui che il rilassamento di preparazioni isolate dell’aorta toracica del  coniglio   e di altri vasi sanguigni da parte dell’ACh richiede la presenza di cellule endoteliali e che l’ACh, agendo sui recettori muscarinici di queste cellule, stimola il rilascio di una sostanza che provoca il liscio vascolare rilassamento muscolare.

Proponiamo che questo possa essere uno dei principali meccanismi di vasodilatazione indotta da ACh in vivo. I rapporti iniziali su alcuni aspetti del lavoro sono stati riportati altrove.

Qui viene divulgato uno Staphylococcus aureus leukocidin  a due componenti isolato e purificato, qui denominato LukAB, e i suoi componenti LukA e   LukB  ,   anticorpi specifici LukA , anticorpi  specifici    LukB    , composizioni terapeutiche contenenti LukA e/o  LukB  o   anti  –  LukA e/o   anti anticorpi  .-  LukB   , usi delle composizioni per il trattamento dell’infiammazione acuta o dell’infezione da S. aureus, metodi per identificare gli inibitori della citotossicità mediata da LukAB dei fagociti umani e metodi per utilizzare LukAB come marker per predire la gravità dell’infezione da Staphylococcus aureus.

Purificazione dell’RNA globinico messaggero biologicamente attivo mediante cromatografia acido-cellulosa oligotimidil.

È stata descritta una tecnica conveniente per la purificazione parziale di grandi quantità di mRNA ricco di poli (acido adenilico) funzionale. Il metodo consiste nel legare mRNA ricco in poli (acido adenilico) a colonne con acido oligotimidilico-cellulosa e la sua eluizione con tamponi a bassa forza ionica. L’mRNA della globina di coniglio biologicamente attivo    è stato purificato mediante questa procedura e testato per la sua capacità di guidare la  sintesi della globina di coniglio   in un estratto tumorale di ascite acellulare. Poiché vari mRNA di mammiferi sembrano essere ricchi di poli (acido adenilico)  e possono essere tradotti in un estratto privo di cellule di ascite, questo approccio dovrebbe rivelarsi generalmente utile come passaggio iniziale nell’isolamento di specifici mRNA.

La sequenza AU conservata dalla regione 3 ‘non tradotta dell’mRNA di GM-CSF media la degradazione selettiva dell’mRNA.

  • Gli mRNA di geni espressi in modo transitorio spesso contengono una sequenza ricca di AU nella regione 3 ‘non tradotta. Abbiamo introdotto la sequenza AT a 51 nucleotidi dal gene della linfochina umana, GM-CSF, nella regione 3’ non tradotta del  gene della beta-globina del coniglio.
  • I nostri esperimenti mostrano che ciò ha reso l’mRNA della beta-globina altrimenti stabile altamente instabile in vivo  . L’instabilità conferita dalla sequenza AU nell’mRNA è stata parzialmente alleviata trattando le cellule con cicloesimmide.
  • Proponiamo che le sequenze di AU siano un segnale di riconoscimento per una via di elaborazione dell’mRNA che degrada specificamente l’mRNA per alcune linfochine, citochine e proto-oncogeni.

Miglioramento a lungo termine della trasmissione sinaptica nell’area dentata del   coniglio anestetizzato   dopo la stimolazione del percorso di perforazione.

  1. I postumi della stimolazione ripetuta delle fibre del percorso di perforazione nella regione dentata della formazione dell’ippocampo sono stati studiati utilizzando microelettrodi extracellulari in  conigli  anestetizzati con uretano .
  2. In quindici conigli su diciotto    , la risposta della popolazione registrata da cellule granulari nella regione concava a salve di singole corsie perforate è stata migliorata per periodi che vanno da 30 minuti a 10 ore dopo una o più sessioni di allenamento di condizionamento a 10-20/s per 10-15 secondi. o 100 / s per 3-4 secondi 3.
  3. La risposta della popolazione è stata analizzata per tre parametri: l’  ampiezza del potenziale eccitatorio postsinaptico della popolazione (epsp), che segnala la depolarizzazione delle cellule granulari, e l’ampiezza e la latenza del salto della popolazione, che segnala la scarica delle cellule granulari.
  4. Tutti e tre i parametri sono stati migliorati nel 29% degli esperimenti; in altri esperimenti con cambiamenti a lungo termine, il miglioramento è stato limitato a uno o due dei tre parametri
  5. Il segno più comune di gravità, che si verifica nel 57% di tutti gli esperimenti, è stato una riduzione della latenza di crescita della popolazione. L’ampiezza della popolazione epsp è aumentata del 43% e il salto della popolazione nel 40% di tutti gli esperimenti.
  6. Durante il condizionamento a 10-20 / s, c’è stato un massiccio aumento del salto di popolazione (“aumento di frequenza”). L’ago è stato soppresso durante la stimolazione a 100/sec. Entrambe le frequenze hanno prodotto un’amplificazione a lungo termine.
  7. I risultati suggeriscono che due meccanismi indipendenti sono responsabili del potenziamento a lungo termine: (a) aumentare l’efficienza della trasmissione sinaptica alle sinapsi della via perforata; (b) aumentare l’eccitabilità della popolazione cellulare dei granuli.

Efficiente sistema di traduzione dipendente dall’mRNA dei lisati dei reticolociti.

  1. È stato descritto un metodo semplice per convertire un estratto di reticolociti di coniglio acellulare standard  (lisato) in un sistema di sintesi proteica mRNA-dipendente.
  2. Il lisato viene pre-incubato con CaCl2 e microcook nucleasi, quindi viene aggiunto un eccesso di glicole etilenico bis (2-amminoetiletere) -N, N’-acido tetraacetico per chelare Ca2 + e inattivare la nucleasi.
  3. I lisati trattati in questo modo hanno un’attività di incorporazione dell’amminoacido endogeno trascurabile, ma il 75% dell’attività originale del lisato può essere recuperato aggiungendo l’mRNA della globina.
  4. Sia l’efficienza dell’utilizzo dell’mRNA aggiunto che la sensibilità del sistema sono molto elevate. Non è stata rilevata alcuna attività nucleasica residua e il tRNA non è funzionalmente danneggiato.

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È stato dimostrato che diversi tipi di mRNA sono tradotti in modo efficiente in prodotti a grandezza naturale con un peso molecolare previsto fino a circa 200.000 e nessun accumulo rilevabile di prodotti proteici incompleti.

La traduzione efficiente dell’RNA da due virus vegetali (virus del mosaico del tabacco e virus del mosaico del fagiolo dall’occhio) richiedeva tRNA eterologo.

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