Il GAL4 di tipo selvaggio si lega al GAL1-10 UASG in vitro

Clonazione ed espressione in Escherichia coli del gene Saccharomyces   cerevisiae OGG1  che codifica per una glicosasi del DNA che asporta la 7,8-diidro-8-ossoguanina e la 2,6-diamino-4-idrossi-5-N-metilformamidopirimidina. Il ceppo mutatore spontaneo di Escherichia coli (fpg mutY) è stato utilizzato per clonare il gene OGG1 da   S.accharomyces  cerevisiae  , che codifica per l’attività della glicosilasi del DNA che esclude la 7,8-diidro-8-ossoguanina (8-OxoG). E. coli (fpg mutY) è stato trasformato con una libreria di DNA di lievito e sono stati selezionati cloni che hanno mostrato una mutagenesi spontanea ridotta.

  1. L’attività antimutatoria era dovuta a pYSB10  ,  un plasmide ricombinante da   11 kbp. Gli estratti privi di cellule di E. coli (fpg mutY) che trasportano pYSB10  hanno un’attività  enzimatica che scinde un oligonucleotide 34 –  mer   contenente un singolo 8-oxoG contro la citosina (8-OxoG / C).
  2. Il frammento di DNA di lievito da 1,7 kbp che inibisce la mutagenesi spontanea e genera eccessivamente l’attività di scissione di 8-OxoG / C è stato sequenziato e mappato sul cromosoma XIII.
  3. Il sequenziamento del DNA ha identificato il frame di lettura aperto, denominato OGG1, che codifica per una proteina di 376 aminoacidi con un peso molecolare di 43 kDa. Il gene OGG1 è stato inserito nel plasmide pUC19, risultando in pYS  B110  . E. coli (fpg) che ospita pYSB110 è stato  utilizzato  per purificare   la proteina Ogg1 di S.  cerevisiae   fino all’apparente omogeneità.
  4. La proteina Ogg1 ha attività di glicosilasi del DNA che rilascia 8-OxoG e 2,6-diammino-4-idrossi-5-N-metilformamidopirimidina.
  5. La proteina Ogg1 taglia preferenzialmente il DNA che contiene 8-OxoG la citosina opposta (8-OxoG/C) o la timina (8-OxoG/T). Al contrario, la proteina Ogg1 non taglia il duplex in cui l’adenina è posta di fronte a 8-OxoG (8-OxoG / A).
  6. Il meccanismo di scissione del filamento da parte della proteina Ogg1 è probabilmente dovuto all’escissione di 8-OxoG seguita dall’eliminazione della beta nel sito di apurina / apirimidina risultante.

Leganti per il recettore beta-glucano, Dectin-1, assegnati utilizzando microarrays di sonde oligosaccaridi di “design” (neoglicolipidi) a base di polisaccaridi glucano.

  • La dectina-1 è un recettore simile alla lectina di tipo C sui leucociti che media la fagocitosi e la produzione di mediatori dell’infiammazione nell’immunità innata ai patogeni fungini.
  • La dectina-1 non contiene i residui coinvolti nella legatura del calcio, che media il legame dei carboidrati da parte delle lectine di tipo C classiche; tuttavia, si lega allo zimosan, un estratto ricco di beta-glucano di   S.  acharomyces   cerevisiae  sotto forma di particelle, e il legame è inibito dai polisaccaridi ricchi di beta1,3 o da entrambi beta1,3- e beta1,6-glucosio.
  • I ligandi oligosaccaridi sui glucani riconosciuti da Dectin-1 devono ancora essere definiti con precisione. Inoltre, non è noto se la dectina-1 possa interagire con altri tipi di carboidrati.
  • Lo abbiamo testato perché la dectina-1 mostra un legame indipendente dal glucano con un sottoinsieme di cellule T ed è coinvolta nell’innescare la loro proliferazione.
  • Qui  assegniamo ligandi oligosaccaridi per Dectin-1 utilizzando la tecnologia di microarray di oligosaccaridi a base di neoglicolipide, un approccio unico alla costruzione di microarray di sonde oligosaccaridi legate ai lipidi  dalle fonti desiderate.
  •  Generiamo microarray di “design” dai tre polisaccaridi del glucano, un  glucano neutro solubile isolato da   S. cerevisiae   e due glucani batterici, kurdlan di Alcaligenes faecalis e pustulan di Umbilicaria papullosa, e sono usati in combinazione con 187 diverse sonde oligosaccaridiche definite in sequenza, principalmente di tipo mammifero.
  • Tra questi, il legame della dectina-1 viene rilevato solo con oligomeri di glucosio legati a 1,3  ,  con la lunghezza minima richiesta per il legame rilevabile di 10 o 11  mer  . Pertanto, i ligandi assegnati finora sono esogeni piuttosto che endogeni. Inoltre, mostriamo che i ligandi della dectina-1, 11-13 gluco-oligomeri  ,  in forma raggruppata (visualizzata sui liposomi), imitano i beta-glucani ad alto peso molecolare e competono con il legame zymosan e il rilascio alfa del fattore di necrosi tumorale dall’espressione della dectina-1 linea di macrofagi cellulari.

La trascrizione  dei geni  necessari per l’utilizzo del galattosio in Saccharomyce  s  cerevisiae  è  principalmente controllata    dalla proteina attivante la trascrizione GAL4  .

  • Le  sequenze di  attivazione a monte del galattosio (UASG)  della maggior parte dei geni  GAL  hanno  più  siti con    cui    GAL4 può  legarsi   . In questo rapporto, confrontiamo le proprietà di legame dei    derivati  ​​GAL4 e GAL4  wild-type che trasportano il dominio di legame del DNA N-terminale con più   siti di legame   del DNA  in  vitro.
  • Per produrre GAL4 di tipo selvatico  , abbiamo  costruito     baculovirus  ricombinanti per l’ espressione  ionica  nelle  cellule  di insetti  È stato scoperto  che il  GAL4  ricombinante di tipo selvaggio si   lega efficacemente a un oligonucleotide  contenente  il  sito di legame del   DNA   17mer  di  xensor   di  GAL4 in  un’analisi di  spostamento elettroforetico .
  • L’esperimento dell’impronta  ha rivelato   che il GAL4 di tipo selvaggio  si lega ai   quattro siti di legame del DNA GAL4   di UASG  GAL1-10  ; tuttavia, a differenza del frammento N-terminale di GAL4 contenente solo  domini di legame /  dimerizzazione  del DNA  , si lega a  ciascuno di   questi   s  con   affinità leggermente diverse.
  • All’aumentare della concentrazione di  GAL4 (  1-147   ), vengono  compilati quattro siti   nel seguente ordine: sito II,   sito  IV,   sito  I  e   sito  III  . Nell’esperimento  GAL4 di tipo selvatico , i    successivi quattro siti  sono  completamente   occupati all’incirca alla stessa   concentrazione di  proteine .
  • Nelle tracce  di GAL4 di tipo selvatico su USAG,   sono rilevabili    miglioramenti e  protezione dei tagli  sensibili  del DNA tra  i siti   III   e  IV  ,  indicando  la   formazione  di anse  tra i siti distanziati  su una  misura   

Recombinant S. cerevisiae IFM1, GST, E.coli-10ug

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Recombinant Human IL 24 Protein, Untagged, S. cerevisiae-10ug

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Recombinant S. cerevisiae SPT15 Protein, His, Yeast-10ug

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Recombinant S. cerevisiae SPT15 Protein, His, Yeast-50ug

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NATtrol MERS-CoV Stock (Qualitative) (1 mL)

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Recombinant Human Insulin Protein, Untagged, S. cerevisiae-25mg

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Recombinant S. cerevisiae SPT15 Protein, His, Yeast-100ug

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Recombinant S. cerevisiae SPT15 Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant S. cerevisiae SPT15 Protein, His, Yeast-500ug

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Recombinant Human IL 24 Protein, Untagged, S. cerevisiae-1mg

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Recombinant Human IL 24 Protein, Untagged, S. cerevisiae-2ug

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Recombinant Human Insulin Protein, Untagged, S. cerevisiae-2mg

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Recombinant HPV-16 L1 Protein (Full Length) (S. cerevisiae)

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Recombinant S. cerevisiae HYP2 Protein, His-SUMO, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae DDP1 Protein, His-SUMO, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae HYP2 Protein, His-SUMO, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae HYP2 Protein, His-SUMO, E.coli-50ug

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Recombinant S. cerevisiae DDP1 Protein, His-SUMO, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Nicotinamidase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae HYP2 Protein, His-SUMO, E.coli-100ug

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Recombinant S. cerevisiae RAD52 Protein, His-SUMO, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Nicotinamidase Protein, His, E.coli-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Exopolyphosphatase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Exopolyphosphatase Protein, His, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Neutral trehalase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Exopolyphosphatase Protein, His, E.coli-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Exopolyphosphatase Protein, His, E.coli-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Neutral trehalase Protein, His, E.coli-100ug

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Recombinant other HSP104 Saccharomyces Protein, Untagged, S. cerevisiae-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Adenosylhomocysteinase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant Saccharomyces Cerevisiae NAT2 Protein (aa 1-288) [His]

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Recombinant Saccharomyces Cerevisiae NAT3 Protein (aa 1-195) [His]

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NATtrol Norovirus Group II (Recombinant) Stock (1 mL)

NATNOVII-ST Zeptometrix 1 mL 1281 EUR

Recombinant S. cerevisiae Trehalose-phosphatase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Trehalose-phosphatase Protein, His, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Trehalose-phosphatase Protein, His, E.coli-50ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, E.coli-1mg

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NATtrol SARS-CoV-2 (recombinant) Stock (1 x 1.0mL)

0831042 Zeptometrix - 693 EUR

Recombinant S. cerevisiae Trehalose-phosphatase Protein, His, E.coli-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Trehalose-phosphatase Protein, His, E.coli-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Alpha-galactosidase 1 Protein, His, Yeast-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, E.coli-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, E.coli-200ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, E.coli-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-50ug

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Recombinant S. cerevisiae Homocysteine S-methyltransferase 1 Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Homocysteine S-methyltransferase 1 Protein, His, E.coli-200ug

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Recombinant S. cerevisiae Homocysteine S-methyltransferase 1 Protein, His, E.coli-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Alpha-galactosidase 1 Protein, His, Yeast-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant S. cerevisiae Pyruvate carboxylase 1 Protein, His, Yeast-500ug

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Recombinant Saccharomyces cerevisiae Homocysteine S-methyltransferase 1 (MHT1)

CSB-RP142674Ba Cusabio 5328 mg Ask for price

Recombinant Saccharomyces cerevisiae Homocysteine S-methyltransferase 1(MHT1)

AP72241 SAB 1mg 2826 EUR

Recombinant Saccharomyces cerevisiae Actin (ACT1)

CSB-EP001205SVG Cusabio 11337 mg Ask for price

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae GSR Protein

VAng-Wyb4133-500g Creative Biolabs 500 µg 3237.6 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TXN Protein

VAng-Wyb6094-1mg Creative Biolabs 1 mg 8420.4 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TXN Protein

VAng-Wyb6094-500g Creative Biolabs 500 µg 4965.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-50ug

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Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-10ug

QP7341-ye-10ug EnQuireBio 10ug 434.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-1mg

QP7341-ye-1mg EnQuireBio 1mg 3296.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-50ug

QP7341-ye-50ug EnQuireBio 50ug 576 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae DSDA Protein

VAng-Wyb4554-200g Creative Biolabs 200 µg 2904 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae GAS2 Protein

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Recombinant Saccharomyces Cerevisiae GLC8 Protein

VAng-Wyb4699-100g Creative Biolabs 100 µg 4320 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TXN2 Protein

VAng-Wyb6098-500g Creative Biolabs 500 µg 4965.6 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM14 Protein

VAng-Wyb6025-1mg Creative Biolabs 1 mg 37512 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM14 Protein

VAng-Wyb6025-500g Creative Biolabs 500 µg 24284.4 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM14 Protein

VAng-Wyb6025-50g Creative Biolabs 50 µg 7365.6 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM16 Protein

VAng-Wyb6026-1mg Creative Biolabs 1 mg 37512 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM16 Protein

VAng-Wyb6026-500g Creative Biolabs 500 µg 24284.4 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TIM16 Protein

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Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-100ug

QP8802-ec-100ug EnQuireBio 100ug 848.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-200ug

QP8802-ec-200ug EnQuireBio 200ug 1338 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-500ug

QP8802-ec-500ug EnQuireBio 500ug 1816.8 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, E.coli-50ug

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Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-10ug

QP8802-ye-10ug EnQuireBio 10ug 434.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-1mg

QP8802-ye-1mg EnQuireBio 1mg 3296.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-50ug

QP8802-ye-50ug EnQuireBio 50ug 576 EUR

Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-100ug

QP7196-ec-100ug EnQuireBio 100ug 848.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-200ug

QP7196-ec-200ug EnQuireBio 200ug 1338 EUR

Recombinant S. cerevisiae Dipeptidyl aminopeptidase A Protein, His, E.coli-500ug

QP7196-ec-500ug EnQuireBio 500ug 1816.8 EUR

Recombinant S. cerevisiae Translation Associated Element 1/TAE1/NTM1 (C-6His)

AP74926 SAB 1mg 3209 EUR

Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-100ug

QP7341-ye-100ug EnQuireBio 100ug 945.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His, Yeast-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Ubiquitin-like protein SMT3 Protein, His, Yeast-1mg

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Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-1mg

QP9099-ye-1mg EnQuireBio 1mg 3296.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-50ug

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NATtrol Norovirus Group I (Recombinant) (Stool Matrix) (0.5 mL)

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NATtrol Norovirus Group II (Recombinant) (Stool Matrix) (0.5 mL)

NATNOVII-GP Zeptometrix 0.5 mL 55 EUR

Heat Shock Protein 104 Saccharomyces cerevisiae (Recombinant)

22061019-1 Glycomatrix 10 µg 137.27 EUR

Heat Shock Protein 104 Saccharomyces cerevisiae Recombinant

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Recombinant Saccharomyces Cerevisiae HSP104 Protein

VAng-Wyb4797-1mg Creative Biolabs 1 mg 13194 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae HSP104 Protein

VAng-Wyb4797-50g Creative Biolabs 50 µg 1887.6 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae MER1 Protein (aa 1-270) [His]

VAng-Wyb5023-1mg Creative Biolabs 1 mg 5140.8 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-100ug

QP8802-ye-100ug EnQuireBio 100ug 945.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant S. cerevisiae Cystathionine beta-synthase Protein, His, Yeast-500ug

QP8802-ye-500ug EnQuireBio 500ug 2164.8 EUR

Recombinant S. cerevisiae Alpha-galactosidase 1 Protein, His-SUMO, E.coli-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Alpha-galactosidase 1 Protein, His-SUMO, E.coli-1mg

QP7286-ec-1mg EnQuireBio 1mg 2763.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae Alpha-galactosidase 1 Protein, His-SUMO, E.coli-50ug

QP7286-ec-50ug EnQuireBio 50ug 522 EUR

Recombinant S. cerevisiae Serine--tRNA ligase, cytoplasmic Protein, His, E.coli-1mg

QP7297-ec-1mg EnQuireBio 1mg 2763.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae Glycerol 2-dehydrogenase (NADP(+)) Protein, His, Yeast-1mg

QP7055-ye-1mg EnQuireBio 1mg 3296.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae Ubiquitin-like protein SMT3 Protein, His, Yeast-100ug

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Recombinant S. cerevisiae Ubiquitin-like protein SMT3 Protein, His, Yeast-10ug

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Recombinant S. cerevisiae Ubiquitin-like protein SMT3 Protein, His, Yeast-500ug

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Recombinant S. cerevisiae Ubiquitin-like protein SMT3 Protein, His, Yeast-50ug

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Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-100ug

QP9099-ye-100ug EnQuireBio 100ug 945.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant S. cerevisiae Acyl-CoA-binding protein Protein, His, Yeast-500ug

QP9099-ye-500ug EnQuireBio 500ug 2164.8 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae SUMO E1 Protein

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Recombinant Saccharomyces Cerevisiae TM Pst1 Protein

VAng-Wyb6034-50g Creative Biolabs 50 µg 2047.2 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae Kex-2 Protein

VAng-Wyb4887-250g Creative Biolabs 250 µg 2250 EUR

Recombinant Saccharomyces Cerevisiae Kex-2 Protein

VAng-Wyb4887-50g Creative Biolabs 50 µg 1528.8 EUR

Recombinant S. cerevisiae GTP-binding protein YPT1 Protein, His-SUMO, E.coli-1mg

QP7341-ec-1mg EnQuireBio 1mg 2763.6 EUR

Recombinant S. cerevisiae A-agglutinin-binding subunit Protein, His, Yeast-10ug

QP7176-ye-10ug EnQuireBio 10ug 434.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae A-agglutinin-binding subunit Protein, His, Yeast-1mg

QP7176-ye-1mg EnQuireBio 1mg 3296.4 EUR

Recombinant S. cerevisiae A-agglutinin-binding subunit Protein, His, Yeast-50ug

QP7176-ye-50ug EnQuireBio 50ug 576 EUR

Legame di GAL4 di  tipo selvaggio  a un forte  sito  di legame   vicino al senso   ,  come  legame  a  un sito    mutante   adiacente sia  nella   mobilità  elettroforetica  che  nei  cambiamenti  dell’impronta GAL4 (1-147)  e GAL4 (1-147) collegati a porzioni della regione attivante II del GAL4 II  non sono stati  in grado di co  -legare   il DNA  nel  nostro  test  . Concludiamo  dall’osservazione  che  il GAL4  di tipo selvaggio ha una funzione  cooperativa di legame del DNA  che  differisce  dal  legame  e dalla   dimerizzazione  del DNA o  dall’attivazione trascrizionale  e  possibilmente svolge un ruolo importante nella  regolazione  fine della trascrizione del gene  GAL .

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