Il GAL4 di tipo selvaggio si lega al GAL1-10 UASG in vitro

La trascrizione  dei geni  necessari per l’utilizzo del galattosio in Saccharomyce  s  cerevisiae  è  principalmente controllata    dalla proteina attivante la trascrizione GAL4  .

• Le  sequenze di  attivazione a monte del galattosio (UASG)  della maggior parte dei geni  GAL  hanno  più  siti con    cui    GAL4 può  legarsi   . In questo rapporto, confrontiamo le proprietà di legame dei    derivati  ​​GAL4 e GAL4  wild-type che trasportano il dominio di legame del DNA N-terminale con più   siti di legame   del DNA  in  vitro.
• Per produrre GAL4 di tipo selvatico  , abbiamo  costruito     baculovirus  ricombinanti per l’ espressione  ionica  nelle  cellule  di insetti  . È stato scoperto  che il  GAL4  ricombinante di tipo selvaggio si   lega efficacemente a un oligonucleotide  contenente  il  sito di legame del   DNA   17mer  di  xensor   di  GAL4 in  un’analisi di  spostamento elettroforetico .
• L’esperimento dell’impronta  ha rivelato   che il GAL4 di tipo selvaggio  si lega ai   quattro siti di legame del DNA GAL4   di UASG  GAL1-10  ; tuttavia, a differenza del frammento N-terminale di GAL4 contenente solo  domini di legame /  dimerizzazione  del DNA  , si lega a  ciascuno di   questi   s  con   affinità leggermente diverse.
• All’aumentare della concentrazione di  GAL4 (  1-147   ), vengono  compilati quattro siti   nel seguente ordine: sito II,   sito  IV,   sito  I  e   sito  III  . Nell’esperimento  GAL4 di tipo selvatico , i    successivi quattro siti  sono  completamente   occupati all’incirca alla stessa   concentrazione di  proteine .
• Nelle tracce  di GAL4 di tipo selvatico su USAG,   sono rilevabili    miglioramenti e  protezione dei tagli  sensibili  del DNA tra  i siti   III   e  IV  ,  indicando  la   formazione  di anse  tra i siti distanziati  su una  misura   . 

Legame di GAL4 di  tipo selvaggio  a un forte  sito  di legame   vicino al senso   ,  come  legame  a  un sito    mutante   adiacente sia  nella   mobilità  elettroforetica  che  nei  cambiamenti  dell’impronta . GAL4 (1-147)  e GAL4 (1-147) collegati a porzioni della regione attivante II del GAL4 II  non sono stati  in grado di co  -legare   il DNA  nel  nostro  test  . Concludiamo  dall’osservazione  che  il GAL4  di tipo selvaggio ha una funzione  cooperativa di legame del DNA  che  differisce  dal  legame  e dalla   dimerizzazione  del DNA o  dall’attivazione trascrizionale  e  possibilmente svolge un ruolo importante nella  regolazione  fine della trascrizione del gene  GAL .