Metodo di microbiopsia per l’analisi immunoistologica e morfologica

• L’angiogenesi, il processo di formazione di nuovi vasi da un sistema vascolare esistente, è un processo critico all’inizio dello sviluppo.
• Tuttavia, l’angiogenesi si verifica raramente negli adulti, tranne che in risposta alla stimolazione ormonale ciclica dell’ovaio e dell’utero, in risposta a lesioni e in risposta a condizioni patologiche come cancro e diabete.
• Tie2 (noto anche come   Tek  ) è un nuovo recettore tirosin-chinasi endoteliale specifico che ha dimostrato di essere essenziale per lo sviluppo del sistema vascolare embrionale; I topi knockout Tie2 muoiono entro 10,5 giorni embrionali con difetti specifici nella formazione di microvasi.
• Tie2 è sottoregolato nelle fasi successive dell’embriogenesi e la sua funzione nell’adulto è relativamente inesplorata.
• Per ottenere informazioni sulle potenziali funzioni di Tie2 nel sistema vascolare adulto, è stata esaminata l’espressione di Tie2 nei   tessuti adulti  sottoposti ad angiogenesi e nei   tessuti a  riposo .
• L’espressione di Tie2 è stata localizzata dall’immunoistochimica nell’endotelio neovascolare nei   tessuti di  ratti sottoposti ad angiogenesi durante la maturazione follicolare stimolata dagli ormoni e lo sviluppo uterino e nella guarigione delle ferite cutanee. I saggi di immunoprecipitazione e protezione dell’RNasi hanno mostrato una sovraregolazione della proteina Tie2 e dell’mRNA rispettivamente nelle ferite della pelle di ratto e topo.
• Inoltre, l’immunoprecipitazione Tie2 dalle ferite cutanee era tirosina-fosforilata, indicando una segnalazione attiva a valle.
• Sorprendentemente, Tie2 è stato espresso anche attraverso lo spettro dei vasi sanguigni inattivi (arterie, vene e capillari) in un’ampia gamma   di tessuti adulti  e Tie2 immunoprecipitato da   tessuti adulti inattivi  è stato anche tirosina-fosforilato. Insieme, questi risultati suggeriscono una doppia funzione di Tie2 nel   tessuto adulto  , coinvolgendo sia l’angiogenesi che il mantenimento vascolare.

La microbiopsia ad aspirazione fine è una tecnica di biopsia relativamente nuova che consente ai fisiologi muscolari di eseguire un campionamento del muscolo scheletrico meno invasivo.

•  Tuttavia, la piccola dimensione del campione ottenuta è spesso considerata insufficiente per alcune analisi. Lo scopo di questo studio era di sviluppare procedure per la morfologia delle fibre muscolari e l’analisi immunoistologica utilizzando la tecnica della microbiopsia.
• Grandi microbiopsie muscolari laterali sono state ottenute con un ago per microbiopsia calibro 14 da quattro uomini sani in due diverse occasioni. Il tessuto è stato   orientato al crioformio  , incorporato in   Tissue  –  Tek e  quindi congelato in isopentano raffreddato con azoto liquido. Le sezioni muscolari sono state colorate con ematossilina ed eosina, laminina, MHCI, MHCIIa e Pax7 per il conteggio delle fibre, l’area media delle fibre, la tipizzazione delle fibre muscolari e l’osservazione delle cellule satelliti.
• Il peso del campione microbico medio ± SD (intervallo) era 18,3 ± 2,9 mg (14-22 mg). Il numero medio di fibre nei campioni microbiologici era 150,4 ± 120,6 (64-366). Tutte le fibre vitali sono state misurate per ciascun campione e l’area media delle fibre era 4385,1 ± 1265,8 µm2 (977,0-10,132,93 µm2). Non c’era differenza di tempo significativa (P = 0,69) nell’area media delle fibre.

I risultati suggeriscono il potenziale utilizzo di una tecnica di biopsia muscolare “minimamente invasiva” per l’analisi immunoistologica e morfologica. Ciò potrebbe fornire a medici e ricercatori ulteriori dati per studi futuri. Sono necessarie ulteriori ricerche per determinare l’applicabilità e i potenziali fattori limitanti di questa tecnica.