Metodo di microbiopsia per l’analisi immunoistologica e morfologica

I macrofagi residenti nei tessuti  sono derivati ​​da precursori del midollo eritro derivati ​​dal sacco vitellino. La maggior parte delle cellule ematopoietiche si rinnova dalle cellule staminali ematopoietiche mature (HSC), tuttavia i macrofagi nei   tessuti adulti  possono autoesistere indipendentemente dalle HSC. Le cellule progenitrici in vitro con potenziale macrofagico sono state descritte nel sacco vitellino prima della comparsa dell’HSC e i macrofagi fetali possono svilupparsi indipendentemente da Myb,  un fattore di trascrizione richiesto per l’HSC, e possono persistere nei   tessuti adulti.

  1.  Tuttavia, l’origine dei macrofagi adulti e il contributo qualitativo e quantitativo delle HSC e dei presunti progenitori non HSC non sono ancora chiari.
  2. Qui mostriamo ai topi che la stragrande maggioranza dei macrofagi che risiedono nei  tessuti adulti  nel fegato (cellule di Kupffer), nel cervello (microglia), nell’epidermide (cellule di Langerhans) e nei polmoni (macrofagi alveolari) provengono da Tie2 (+) (noto anche come   Tek  ) . ) una via cellulare che produce cellule progenitrici Csf1r (+) eritro-mieloidi (EMP) diverse dalle HSC.
  3. Gli EMP si sviluppano nel sacco vitellino il giorno embrionale (E) 8.5, migrano e colonizzano il fegato fetale nascente prima di E10.5 e causano eritrociti, macrofagi, granulociti e monociti fetali almeno a E16.5. Le cellule derivate dalle HSC sostituiscono quindi eritrociti, granulociti e monociti.
  4. Le cellule di Kupffer, la microglia e le cellule di Langerhans sono sostituite solo marginalmente nei topi di un anno, mentre i macrofagi alveolari possono essere gradualmente sostituiti nei topi senescenti. I nostri esperimenti di mappatura del destino identificano nel fegato fetale una sequenza di ematopoiesi del sacco vitellino derivata da EMP e HSC e identificano l’EMP del sacco vitellino come una fonte comune di  macrofagi tissutali.

flk-1, una tirosina chinasi del recettore flt-associato, è un marker precoce dei precursori delle cellule endoteliali.

  1. Abbiamo utilizzato la RT-PCR per schermare le cellule staminali embrionali murine pluripotenti per identificare le tirosin-chinasi del recettore (RTK) potenzialmente coinvolte nella determinazione o differenziazione delle linee cellulari nello sviluppo iniziale dei topi.
  2. Sono state identificate quattordici diverse sequenze tirosin-chinasi. I modelli di espressione dei quattro RTK sono stati esaminati  e tutti sono stati espressi nell’embrione di topo durante o subito dopo la gastrulazione.
  3. Presentiamo qui un modello di espressione dettagliato di uno di questi RTK, il gene correlato flt flk-1. L’analisi dell’ibridazione in situ dell’embrione allo stadio della striscia primitiva tardiva ha rivelato che flk-1 era espresso nel mesoderma embrionale prossimale-laterale; tessuto   dedicato al cuore.
  4. Negli stadi headfold, la colorazione era confinata alle cellule endocardiche delle gemme cardiache, nonché alle isole di sangue nel sacco vitellino viscerale e alla malattia allantoica in via di sviluppo.
  5. Durante la formazione è stata rilevata una colorazione irregolare e irregolare nell’endotelio di tutti i principali vasi sanguigni embrionali ed extraembrionali.
  6. Durante l’organogenesi precoce, l’espressione è stata rilevata nei vasi sanguigni di   tessuti altamente vascolarizzati   come cervello, fegato, polmone e placenta. Poiché flk-1 è stato espresso nelle prime cellule mesodermiche prima di qualsiasi evidenza morfologica di differenziazione delle cellule endoteliali (vasculogenesi), così come nelle cellule che formano vasi sanguigni da quelli preesistenti (angiogenesi), sembra essere un marker molto precoce di precursori cellulari.
  7. In precedenza abbiamo riportato che un altro nuovo RTK, denominato   tek  , è stato espresso nella differenziazione delle cellule endoteliali.
  8. Mostriamo qui che le trascrizioni flk-1 sono espresse un giorno embrionale completo prima delle prime   trascrizioni tek   . L’espressione di questi due RTK sembra correlare rispettivamente con la specificazione e la differenziazione precoce della linea cellulare endoteliale e quindi può svolgere un ruolo importante nella formazione di questa linea.

Espressione e fosforilazione di Tie2 in   tessuti  adulti angiogenici e inattivi.

  • L’angiogenesi, il processo di formazione di nuovi vasi da un sistema vascolare esistente, è un processo critico all’inizio dello sviluppo.
  • Tuttavia, l’angiogenesi si verifica raramente negli adulti, tranne che in risposta alla stimolazione ormonale ciclica dell’ovaio e dell’utero, in risposta a lesioni e in risposta a condizioni patologiche come cancro e diabete.
  • Tie2 (noto anche come   Tek  ) è un nuovo recettore tirosin-chinasi endoteliale specifico che ha dimostrato di essere essenziale per lo sviluppo del sistema vascolare embrionale; I topi knockout Tie2 muoiono entro 10,5 giorni embrionali con difetti specifici nella formazione di microvasi.
  • Tie2 è sottoregolato nelle fasi successive dell’embriogenesi e la sua funzione nell’adulto è relativamente inesplorata.
  • Per ottenere informazioni sulle potenziali funzioni di Tie2 nel sistema vascolare adulto, è stata esaminata l’espressione di Tie2 nei   tessuti adulti  sottoposti ad angiogenesi e nei   tessuti a  riposo .
  • L’espressione di Tie2 è stata localizzata dall’immunoistochimica nell’endotelio neovascolare nei   tessuti di  ratti sottoposti ad angiogenesi durante la maturazione follicolare stimolata dagli ormoni e lo sviluppo uterino e nella guarigione delle ferite cutanee. I saggi di immunoprecipitazione e protezione dell’RNasi hanno mostrato una sovraregolazione della proteina Tie2 e dell’mRNA rispettivamente nelle ferite della pelle di ratto e topo.
  • Inoltre, l’immunoprecipitazione Tie2 dalle ferite cutanee era tirosina-fosforilata, indicando una segnalazione attiva a valle.
  • Sorprendentemente, Tie2 è stato espresso anche attraverso lo spettro dei vasi sanguigni inattivi (arterie, vene e capillari) in un’ampia gamma   di tessuti adulti  e Tie2 immunoprecipitato da   tessuti adulti inattivi  è stato anche tirosina-fosforilato. Insieme, questi risultati suggeriscono una doppia funzione di Tie2 nel   tessuto adulto  , coinvolgendo sia l’angiogenesi che il mantenimento vascolare.

La microbiopsia ad aspirazione fine è una tecnica di biopsia relativamente nuova che consente ai fisiologi muscolari di eseguire un campionamento del muscolo scheletrico meno invasivo.

  •  Tuttavia, la piccola dimensione del campione ottenuta è spesso considerata insufficiente per alcune analisi. Lo scopo di questo studio era di sviluppare procedure per la morfologia delle fibre muscolari e l’analisi immunoistologica utilizzando la tecnica della microbiopsia.
  • Grandi microbiopsie muscolari laterali sono state ottenute con un ago per microbiopsia calibro 14 da quattro uomini sani in due diverse occasioni. Il tessuto è stato   orientato al crioformio  , incorporato in   Tissue  –  Tek e  quindi congelato in isopentano raffreddato con azoto liquido. Le sezioni muscolari sono state colorate con ematossilina ed eosina, laminina, MHCI, MHCIIa e Pax7 per il conteggio delle fibre, l’area media delle fibre, la tipizzazione delle fibre muscolari e l’osservazione delle cellule satelliti.
  • Il peso del campione microbico medio ± SD (intervallo) era 18,3 ± 2,9 mg (14-22 mg). Il numero medio di fibre nei campioni microbiologici era 150,4 ± 120,6 (64-366). Tutte le fibre vitali sono state misurate per ciascun campione e l’area media delle fibre era 4385,1 ± 1265,8 µm2 (977,0-10,132,93 µm2). Non c’era differenza di tempo significativa (P = 0,69) nell’area media delle fibre.

CRAC intermediate 2

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Methadone Intermediate

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Docetaxel intermediate

TBZ2829 ChemNorm 20mg Ask for price

Cabazitaxel intermediate

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LX-4211 intermediate

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LX-2761 intermediate

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LX-2761 intermediate

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LX-4211 intermediate

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Fondaparinux intermediate

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GC5562-1 Glentham Life Sciences 1 615.3 EUR

Alisporivir intermediate-1

HY-P1358 MedChemExpress 1mg 374.4 EUR

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Dolutegravir intermediate-1

D528812 Toronto Research Chemicals 10mg 305 EUR

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HY-100083 MedChemExpress 10mg 308.4 EUR

Dolutegravir intermediate-1

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Pethidine Intermediate A

M339095 Toronto Research Chemicals 5g 1200 EUR

Pethidine Intermediate C

P292503 Toronto Research Chemicals 10mg 397 EUR

Intermediate of Pregabalin

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Intermediate of Pregabalin

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Intermediate of Pregabalin

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Intermediate of Pregabalin

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T0531-5mg TargetMol Chemicals 5mg Ask for price

Dynein intermediate chain 1

E8ET1705-8 EnoGene 100ul 275 EUR

PDE4 inhibitor intermediate 1

HY-U00410 MedChemExpress 5mg 3415.2 EUR

PDE4 inhibitor intermediate 1

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Dynein Intermediate chain Antibody

GWB-8133CE GenWay Biotech 0.1 ml Ask for price

anti-Dynein intermediate chain 1

YF-PA18341 Abfrontier 50 ul 435.6 EUR

anti-Dynein intermediate chain 1

YF-PA18342 Abfrontier 50 ug 435.6 EUR

anti-Dynein intermediate chain 1

YF-PA18343 Abfrontier 100 ug 483.6 EUR

anti-Dynein intermediate chain 1

YF-PA20551 Abfrontier 50 ul 435.6 EUR

anti-Dynein intermediate chain 1

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anti-Dynein intermediate chain 1

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anti-Dynein intermediate chain 1

YF-PA20554 Abfrontier 100 ug 483.6 EUR

Dynein intermediate chain 1 Antibody

49670 SAB 100ul 499 EUR

Dynein intermediate chain 1 Antibody

49670-100ul SAB 100ul 399.6 EUR

Dynein intermediate chain 1 Antibody

49670-50ul SAB 50ul 286.8 EUR

Cartilage intermediate layer protein 1

AP89370 SAB 1mg 2640 EUR

Cartilage intermediate layer protein 1

AP81751 SAB 1mg 2640 EUR

Cartilage intermediate layer protein 1

AP81850 SAB 1mg 2640 EUR

Dynein intermediate chain 1 Rabbit mAb

59540 SAB 100ul 339 EUR

Dynein intermediate chain 1 Rabbit pAb

E2382021 EnoGene 100ul 225 EUR

Dynein intermediate chain 1 Rabbit mAb

A3624 Abclonal 500μL 778.7 EUR

Dynein Intermediate Chain 1 Rabbit mAb

E2R382021 EnoGene 100ul 275 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody

1-CSB-PA321618LA01PGK Cusabio
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody

1-CSB-PA541481LA01ROG Cusabio
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody

1-CSB-PA542165LA01ROH Cusabio
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

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Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

20-abx319793 Abbexa
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Rotavirus A Intermediate capsid protein VP6

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Rotavirus A Intermediate capsid protein VP6

1-CSB-YP542165ROH Cusabio
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Rotavirus A Intermediate capsid protein VP6

1-CSB-EP542165ROH Cusabio
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Rotavirus A Intermediate capsid protein VP6

1-CSB-EP321618RGK Cusabio
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Moramide intermediate (1mg/ml in Acetonitrile)

KIT5925 Toronto Research Chemicals 5x1ml 800 EUR

Intermediate Capsid Protein VP6 (VP6) Antibody

abx319788-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate Capsid Protein VP6 (VP6) Antibody

abx319788-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

abx319789-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

abx319789-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate Capsid Protein VP6 (VP6) Antibody

abx319792-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate Capsid Protein VP6 (VP6) Antibody

abx319792-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

abx319793-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (HRP)

abx319793-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

20-abx319790 Abbexa
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

20-abx319794 Abbexa
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Methadone intermediate (1mg/ml in Acetonitrile)

KIT4120 Toronto Research Chemicals 10x1ml 800 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

abx319790-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

abx319790-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

abx319794-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (FITC)

abx319794-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Lipoproteins, Human Plasma, Intermediate Density

4932-1000 Biovision each 379.2 EUR

Lipoproteins, Intermediate Density, Human Plasma

LIPI17-N Alpha Diagnostics 1 mg 270 EUR

Anti-Dynein intermediate chain 1 (2D10-2A5)

YF-MA18145 Abfrontier 100 ug 435.6 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

20-abx319791 Abbexa
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

20-abx319795 Abbexa
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Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

abx319791-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

abx319791-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

abx319795-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Intermediate capsid protein VP6 Antibody (Biotin)

abx319795-50l Abbexa 50 µl 162.5 EUR

Fmoc-Aph(Hor)-OH (~10% THF) (Degarelix intermediate)

F647563 Toronto Research Chemicals 100mg 184 EUR

Dynein intermediate chain 1 Conjugated Antibody

C49670 SAB 100ul 476.4 EUR

Pethidine intermediate C (1mg/ml in Acetonitrile)

KIT6925 Toronto Research Chemicals 10x1ml 800 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

20-abx103806 Abbexa
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Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

20-abx103807 Abbexa
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Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx431645-200ul Abbexa 200 ul 460.8 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103806-100g Abbexa 100 µg 750 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103806-20g Abbexa 20 µg 275 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103806-50g Abbexa 50 µg 337.5 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103807-100g Abbexa 100 µg 775 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103807-20g Abbexa 20 µg 275 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx103807-50g Abbexa 50 µg 350 EUR

Cartilage Intermediate Layer Protein (CILP) Antibody

abx431645-200l Abbexa 200 µl 387.5 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx146039-100ug Abbexa 100 ug 469.2 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

20-abx113772 Abbexa
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Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx028167-400ul Abbexa 400 ul 627.6 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx028167-80l Abbexa 80 µl 343.2 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx025216-400ul Abbexa 400 ul 627.6 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx025216-80l Abbexa 80 µl 343.2 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx235195-100ug Abbexa 100 ug 661.2 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

20-abx321113 Abbexa
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Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx113772-100l Abbexa 100 µl 612.5 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx028167-400l Abbexa 400 µl 518.75 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx025216-400l Abbexa 400 µl 518.75 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx235195-100g Abbexa 100 µg 350 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx146039-1096tests Abbexa 10 × 96 tests Ask for price

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx146039-596tests Abbexa 5 × 96 tests Ask for price

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx146039-96tests Abbexa 96 tests 337.5 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx321113-100g Abbexa 100 µg 350 EUR

Mitochondrial Intermediate Peptidase (MIPEP) Antibody

abx321113-50g Abbexa 50 µg 250 EUR

Human Cartilage intermediate layer protein 1 (CILP)

1-CSB-YP005437HU Cusabio
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Human Cartilage intermediate layer protein 1 (CILP)

1-CSB-BP005437HU Cusabio
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Human Cartilage intermediate layer protein 1 (CILP)

1-CSB-BP005437HUb1 Cusabio
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Human Intermediate Density Lipoprotein (IDL) Antibody

11390-05011 AssayPro 150 ug 175 EUR

Intermediate Capsid Protein VP6 Polyclonal Antibody

A55018 EpiGentek
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Intermediate Capsid Protein VP6 Polyclonal Antibody

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Intermediate Capsid Protein VP6 Polyclonal Antibody

A57101 EpiGentek
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Dynein Axonemal Light Intermediate Chain 1 Protein

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Dynein Axonemal Light Intermediate Chain 1 Protein

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Dynein Axonemal Light Intermediate Chain 1 Protein

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Intermediate-Early Receptor Protein (NR4A2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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20-abx149883 Abbexa
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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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Cytoplasmic dynein 1 intermediate chain 1 Antibody

DF13277 Affbiotech 100ul 420 EUR

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Cytoplasmic dynein 1 intermediate chain 1 Antibody

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Human Intermediate Density Lipoprotein(IDL)ELISA Kit

QY-E00205 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 2, Axonemal (DNAI2) Antibody

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Dynein Intermediate Chain 1, Axonemal (DNAI1) Antibody

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I risultati suggeriscono il potenziale utilizzo di una tecnica di biopsia muscolare “minimamente invasiva” per l’analisi immunoistologica e morfologica. Ciò potrebbe fornire a medici e ricercatori ulteriori dati per studi futuri. Sono necessarie ulteriori ricerche per determinare l’applicabilità e i potenziali fattori limitanti di questa tecnica.

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