Analisi enzimatica/biochimica di Actinomyces con kit di test commerciali con enfasi sulle specie appena descritte

Nei laboratori di microbiologia clinica, l’identificazione di batteri simili ad Actinomyces può essere molto laboriosa e problematica. Nel presente studio, ci siamo concentrati sui modelli di reattività di 4 kit di test commerciali, RapID ANA II, RapID 32A, RapID CB Plus e BBL Crystal ANR ID, che potrebbero essere utilizzati per una rapida identificazione preliminare degli isolati di Actinomyces appartenenti a Actinomyces appena descritti e specie strettamente imparentate.

Dei 54 ceppi testati, 25 ceppi (46%) sono stati correttamente identificati a livello di genere/gruppo dal sistema BBL Crystal ANR ID, 16 ceppi (30%) da RapID 32 A, 11 ceppi (20%) da RapID CB Plus e 7 ceppi (13%) di RapID ANA II. I problemi principali con questi kit erano dovuti a occasionali deboli reazioni enzimatiche e di fermentazione dello zucchero. In conclusione, la sensibilità e la specificità del substrato cromogenico devono essere migliorate al fine di migliorare l’affidabilità dei risultati dei test di questi kit e il presente database aggiornato al fine di identificare con maggiore precisione Actinomyces appena descritti e specie strettamente correlate.

Sovrapposizione mediata da c-Kit e risultati funzionali e biochimici unici attraverso diverse vie di segnalazione

Un problema critico nella comprensione della segnalazione del recettore tirosina chinasi è il contributo individuale di diverse vie di segnalazione nella regolazione della crescita cellulare, della sopravvivenza e della migrazione. Abbiamo generato un recettore c-Kit funzionalmente e biochimicamente inerte che mancava dei siti di legame per sette vie di segnalazione precoci. Il ripristino dei siti di legame della famiglia Src della chinasi (SFK) nel recettore c-Kit mutato ha ripristinato la sopravvivenza e la migrazione cellulare ma ha salvato solo parzialmente la proliferazione ed è stato associato al salvataggio della chinasi della proteina attivata da Ras / mitogeno, della chinasi Rac / JNK e del fosfatidilinositolo 3-chinasi (chinasi PI-3) / vie Akt.

Al contrario, il ripristino del sito di legame della chinasi PI-3 nel recettore mutato non ha influenzato la proliferazione cellulare ma ha comportato una modesta correzione nella sopravvivenza e migrazione cellulare, nonostante un completo salvataggio nell’attivazione della via della chinasi PI-3 / Akt. Sorprendentemente, il ripristino dei siti di legame per Grb2, Grb7 o fosfolipasi C-gamma non ha avuto alcun effetto sulla crescita cellulare o sulla sopravvivenza, sulla migrazione o sull’attivazione di nessuna delle vie di segnalazione a valle. Questi risultati sostengono che gli SFK svolgono un ruolo unico nel controllo di molteplici funzioni cellulari e nell’attivazione di percorsi biochimici distinti tramite c-Kit.

Misurazione del ligando del KIT/fattore delle cellule staminali: significato clinico e biochimico

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