L’ossido nitrico attiva gli enzimi ciclossigenasi.

Abbiamo valutato il ruolo dell’ossido nitrico (NO) sull’attività delle forme costitutive e inducibili della ciclossigenasi (COX; COX-1 e COX-2, rispettivamente). L’induzione di NO (NOS) e COX (COX-2) sintasi nella  linea cellulare di macrofagi di topo RAW264.7 da parte del   lipopolisaccaride di Escherichia coli (1 microgrammo / ml, 18 h) ha aumentato il rilascio di nitrito (NO2-) e prostaglandina E2 (PGE2 ), rispettivamente NOS e COX. La produzione di NO2 e PGE2 è stata bloccata da inibitori della NOS, NG-monometil-L-arginina o aminoguanidina.

Gli effetti di NG-monometil-L-arginina o aminoguanidina sono stati invertiti mediante co-incubazione con L-Arg, un precursore della sintesi di NO, ma non con D-Arg. Le cellule RAW264.7 stimolate per 18 ore con lipopolisaccaride in  terreno libero da L-Arg (per ridurre la produzione di NO dalla via endogena di NOS) non hanno rilasciato NO2 e hanno accumulato almeno 4 volte meno PGE2 rispetto alle cellule in presenza di L-Arg . Produzione di PGE2 indotta da un trattamento indotto da lipopolisaccaridi di 15 minuti con acido arachidonico RAW264. Le 7 cellule nel mezzo carente di L-Arg sono state ridotte di un fattore 3 rispetto al rilascio ottenuto con le cellule indotte nel mezzo contenente L-Arg.

Per testare l’attivazione di NO della forma indotta di COX in assenza di L-Arg endogeno, i fibroblasti fetali umani sono stati inizialmente stimolati per 18 ore con interleuchina 1 beta. Queste cellule hanno rilasciato PGE2 ma non NO2 coerenti con l’induzione di COX ma non NOS nei fibroblasti.

NO esogeno come soluzione gassosa o rilasciato da donatore di NO, nitroprussiato di sodio o trinitrato glicerico, aumento dell’attività della COX di 5 volte nei fibroblasti stimolati con interleuchina 1 beta; questi effetti sono stati annullati dalla co-incubazione con   l’emoglobina   (10 microM), che lega e inattiva NO, ma non il blu di metilene, un inibitore solubile della guanilato ciclasi.

Inoltre, il nitroprussiato di sodio (0,25-1 mM) ha aumentato la produzione di PGE2 stimolata dall’acido arachidonico da COX-1 e COX-2 ricombinanti murini. Questi risultati mostrano che l’NO migliora l’attività della COX attraverso un meccanismo indipendente dal cGMP e suggerisce che in condizioni in cui sono presenti sia i sistemi NOS che COX, vi è un aumento della produzione di prostaglandine pro-infiammatorie mediata da NO, che può esacerbare la risposta infiammatoria. . I dati suggeriscono che l’NO interagisce direttamente con la COX, causando un aumento dell’attività enzimatica.

Trattamento di un modello murino di anemia falciforme con cellule iPS prodotte da pelle autologa.

Recentemente, è stato dimostrato che   i fibroblasti murini   e umani possono essere riprogrammati per assomigliare alle cellule staminali embrionali introducendo una combinazione di quattro fattori di trascrizione. Tuttavia, il potenziale terapeutico di tali cellule staminali pluripotenti indotte (iPS) è rimasto indefinito. Utilizzando il  modello murino di anemia falciforme umanizzata, mostriamo che i topi possono essere salvati dopo il trapianto con progenitori ematopoietici ottenuti in vitro da cellule iPS autologhe.

Ciò è stato ottenuto correggendo l’   allele dell’emoglobina falciforme umana  mediante il targeting specifico del gene. I nostri risultati forniscono prove per l’uso della riprogrammazione indotta dal fattore di trascrizione in combinazione con la terapia genica e cellulare nel trattamento della malattia nei topi. I problemi associati all’uso di retrovirus e oncogeni per la riprogrammazione devono essere risolti prima che le cellule iPS possano essere prese in considerazione per la terapia umana.

Topi normali, geneticamente a mosaico, costituiti da cellule di teratoma maligno.

  1. Cellule di teratoma maligno  di topo   (o carcinoma embrionale) con il numero corretto di cromosomi modali sono state raccolte dal “nucleo” di corpi embrionali coltivati ​​esclusivamente in vivo come tumore dell’ascite per 8 anni e iniettate in blastocisti con più marcatori genetici per testare le capacità di sviluppo, trucco e reversibilità delle cellule del nucleo di malignità.
  2. Novantatré animali vivi e normali sono stati ottenuti prima e dopo la nascita. Dei 14 analizzati finora, tre erano mosaici genetici cellulari con una percentuale significativa di cellule derivate dal tumore in molti tessuti non in fase di sviluppo, compresi alcuni mai trovati in tumori solidi che si formano negli ospiti trapiantati.
  3. I tessuti funzionavano normalmente e sintetizzavano i loro prodotti specifici (ad es. immunoglobuline,   emoglobina adulta  , proteine ​​del fegato) codificati da alleli di tipo ceppo in loci noti. Inoltre, dal fenotipo del capello è stato rilevato un gene del colore correlato al tumore, l’acciaio, precedentemente sconosciuto per essere presente nelle cellule tumorali.
  4. Anche le cellule derivate dal cancro, che ha la struttura del cromosoma sessuale X / Y, hanno contribuito alla linea germinale e hanno formato spermatozoi funzionali, alcuni dei quali hanno trasferito il gene dell’acciaio alla loro prole. Così, dopo quasi 200 generazioni di trapianti come neoplasia altamente maligna, le cellule centrali del corpo embrionale sembrano essere totipotenti nello sviluppo e in grado di esprimere, in un ordine ordinato nella differenziazione dei tessuti somatici ed embrionali, molti geni finora silenziosi in il tumore di origine.
  5. Questo sistema sperimentale di “ciclizzazione” delle cellule centrali del teratoma da parte dei topi, in combinazione con la mutagenesi sperimentale di queste cellule, potrebbe quindi fornire un nuovo e utile strumento per analisi biochimiche, evolutive e genetiche del differenziamento dei mammiferi.
  6. I risultati forniscono anche un chiaro esempio negli animali delle basi non mutazionali della trasformazione e del recupero maligni. L’origine di questo tumore da un embrione disorganizzato suggerisce che le neoplasie maligne di alcune altre cellule staminali più specializzate possono derivare in modo simile dalla disorganizzazione dei tessuti, portando ad aberrazioni dello sviluppo nell’espressione genica piuttosto che a cambiamenti nella struttura genica.

L’aggiunta di una sequenza ricca di G + C di 40 coppie (GC-clamp) ai frammenti di DNA genomico tramite la reazione a catena della polimerasi si traduce in un migliore rilevamento dei cambiamenti delle singole basi.

  • L’elettroforesi su gel a gradiente denaturante (DGGE) può essere utilizzata per distinguere tra due molecole di DNA che differiscono solo per la sostituzione di una base.
  • Questo metodo rileva circa il 50% di tutti i possibili cambiamenti di una singola base nei frammenti di DNA che vanno da 50 a circa 1000 coppie di basi.
  • Per aumentare il numero di cambiamenti di singole basi che possono essere distinti DGGE, abbiamo utilizzato la reazione a catena della polimerasi per attaccare una sequenza G + C di 40 coppie di basi, denominata GC-clamp, a un’estremità dei frammenti di DNA amplificati che includono il   murino   e l’uomo regioni del gene della beta-globina.
  • Mostriamo che questo morsetto GC consente il rilevamento di mutazioni comprese le mutazioni  dell’emoglobina falciforme   (HbS) e   dell’emoglobina   C (HbC) nel gene della beta-globina umana che in precedenza erano indistinguibili da DGGE.
  • Oltre a fornire un modo semplice per collegare una clip GC a frammenti di DNA genomico, la tecnica di reazione a catena della polimerasi migliora notevolmente la sensibilità di DGGE. Con questo approccio, i frammenti di DNA derivati ​​da meno di 5 ng di DNA genomico umano possono essere rilevati colorando il gel con bromuro di etidio, eliminando la necessità di sonde radioattive.

Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit

abx254159-96tests Abbexa 96 tests 764.4 EUR

Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit

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Mouse hemoglobin (Hb) ELISA Kit

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Mouse hemoglobin (Hb) ELISA Kit

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QY-E20731 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Mouse Hemoglobin ELISA Kit (HB)

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Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit

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Mouse Hemoglobin (HB)ELISA kit

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Mouse Hemoglobin (HB)ELISA kit

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Hemoglobin A1c (HbA1c) Mouse mAb

E35K17t8 EnoGene 100ug 225 EUR

Hemoglobin A1c (HbA1c) Mouse mAb

E35K18v9 EnoGene 100ug 225 EUR

Hemoglobin A1c (HbA1c) Mouse mAb

E35K5a2 EnoGene 100ug 225 EUR

Mouse Hemoglobin Beta (HBb) Protein

20-abx067042 Abbexa
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Mouse Hemoglobin Beta (HBb) Protein

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CLIA kit for Mouse HB (Hemoglobin)

E-CL-M0345 Elabscience Biotech 1 plate of 96 wells 700.8 EUR

Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba)

1-CSB-YP010147MO Cusabio
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Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba)

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Mouse Hemoglobin Polyclonal Antibody

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ELISA kit for Mouse HB (Hemoglobin)

E-EL-M0573 Elabscience Biotech 1 plate of 96 wells 452.4 EUR

ELISA kit for Mouse HB (Hemoglobin)

ELK1354 ELK Biotech 1 plate of 96 wells 446.4 EUR

Mouse Hemoglobin ELISA Kit | E-90HM

E-90HM Immunology Consultants Laboratory 1 x 96 well plate 680 EUR

Mouse Hemoglobin A1c(HbA1c)ELISA Kit

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Mouse Hemoglobin A1c(HbA1c)ELISA Kit

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Mouse Hemoglobin A1c (HbA1c) Assay Kit

80310 Crystal Chem 96 380 EUR

Hemoglobin ELISA Kit (Mouse) (OKIA00096)

OKIA00096 Aviva Systems Biology 96 Wells 777.6 EUR

Mouse Hemoglobin Alpha 1 (HBa1) Protein

20-abx167288 Abbexa
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Mouse Hemoglobin Alpha 1 (HBa1) Protein

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Mouse Fetal Hemoglobin (HbF) ELISA kit

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Hemoglobin A1c (HbA1c) (Mouse) ELISA Kit

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Mouse fetal hemoglobin,HBF ELISA Kit

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Hemoglobin

E61I012 EnoGene 100ug 255 EUR

Hemoglobin

GL7038-10 Glentham Life Sciences 10 37.7 EUR

HB ELISA Kit| Mouse Hemoglobin ELISA Kit

EF013667 Lifescience Market 96 Tests 826.8 EUR

Mouse Hemoglobin A1C, Hba1C GENLISA ELISA

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Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse)

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Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) Protein

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Mouse Hemoglobin Subunit Zeta (HBZ) Protein

abx680395-50g Abbexa 50 µg 225 EUR

Mouse Glycated hemoglobin A1c ELISA kit

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Mouse Glycated hemoglobin A1c ELISA kit

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Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) CLIA Kit

20-abx490037 Abbexa
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Mouse fetal hemoglobin, HBF GENLISA ELISA

KLM1028 Krishgen 1 x 96 wells 341 EUR

Mouse Hemoglobin subunit beta-2 (Hbb-b2)

1-CSB-YP360812MO Cusabio
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Mouse Hemoglobin subunit beta-2 (Hbb-b2)

1-CSB-EP360812MO Cusabio
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Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) ELISA Kit

abx254828-96tests Abbexa 96 tests 801.6 EUR

Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) ELISA Kit

20-abx156705 Abbexa
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Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) ELISA Kit

abx156705-100g Abbexa 100 µg 5575 EUR

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abx156705-50g Abbexa 50 µg 2950 EUR

Mouse Hemoglobin subunit zeta, Hbz ELISA KIT

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Mouse Hemoglobin subunit zeta (HBZ) ELISA Kit

abx526835-96tests Abbexa 96 tests 687.5 EUR

Mouse β Subunits of hemoglobin ELISA kit

E01A22533 BlueGene 96T 700 EUR

Mouse β Subunits of hemoglobin ELISA kit

E03H0229-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

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Mouse Glycated Hemoglobin A1c (GHbA1c) ELISA

KT-58225 Kamiya Biomedical Company 96 tests 981 EUR

OKIA00096-96W - Hemoglobin ELISA Kit (Mouse)

OKIA00096-96W Aviva Systems Biology 1x96wellplate 525 EUR

Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), PE

4-PAB409Mu01-PE Cloud-Clone
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Mouse Hemoglobin subunit alpha, HBA ELISA Kit

ELA-E0517m Lifescience Market 96 Tests 1038 EUR

Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba) ELISA Kit

RK06912 Abclonal 96T 280 EUR

Mouse Hemoglobin subunit alpha(HBA)ELISA Kit

YLA1329MO-48T Shanghai YL Biotech 48T Ask for price

Mouse Hemoglobin subunit alpha(HBA)ELISA Kit

YLA1329MO-96T Shanghai YL Biotech 96T Ask for price

Mouse Hemoglobin A1c (HbA1c) Assay Kit control

80313 Crystal Chem 2 x 0.5 mL 85 EUR

Mouse Glycated Hemoglobin A1c (HbA1c) Protein

20-abx168596 Abbexa
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Mouse Glycosylated hemoglobin A1c ELISA Kit

EK2420 SAB 96 tests 599 EUR

Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), APC

4-PAB409Mu01-APC Cloud-Clone
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Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), Cy3

4-PAB409Mu01-Cy3 Cloud-Clone
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Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), HRP

4-PAB409Mu01-HRP Cloud-Clone
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Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse, Rat)

4-PAB409Ra01 Cloud-Clone
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Recombinant Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba)

CSB-YP010147MO Cusabio 5707 mg Ask for price

Recombinant Mouse Hemoglobin subunit alpha(Hba)

AP70383 SAB 1mg 2826 EUR

Recombinant Mouse Hemoglobin subunit alpha(Hba)

AP72590 SAB each Ask for price

Recombinant Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba)

CSB-EP010147MO Cusabio 1353 mg Ask for price

Mouse Hemoglobin Subunit Alpha (HBA1) ELISA Kit

abx513160-96tests Abbexa 96 tests 801.6 EUR

Hemoglobin mouse monoclonal antibody, Purified

AM20241PU-N Origene Technologies GmbH 100 µg Ask for price

Hemoglobin mouse monoclonal antibody, Purified

AM20241PU-S Origene Technologies GmbH 10 µg Ask for price

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AM20242PU-N Origene Technologies GmbH 100 µg Ask for price

Hemoglobin mouse monoclonal antibody, Purified

AM20242PU-S Origene Technologies GmbH 10 µg Ask for price

Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), FITC

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Cow Hemoglobin

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Questi miglioramenti estendono l’uso di DGGE per rilevare polimorfismi e mutazioni nel DNA genomico e clonato.

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