Aumento della zonulina plasmatica nei pazienti con sepsi

  • La celiachia è un’enteropatia immuno-correlata causata dalla gliadina, un componente del glutine proteico dei cereali. La gliadina induce il rilascio di zonulina MyD88-dipendente    che porta ad un aumento della permeabilità intestinale, un elemento prematuro postulato nella patogenesi della celiachia. Il nostro obiettivo era stabilire le basi molecolari delle interazioni della gliadina con la mucosa intestinale, portando alla compromissione della barriera intestinale.
  • Una colonna di affinità alfa-gliadina è stata caricata con lisati intestinali per identificare la presunta parte legante la gliadina . Sono stati condotti esperimenti in vitro con trasfettanti del recettore delle chemochine CXCR3 per confermare il legame della gliadina e / o 26 peptidi sintetici alfa-gliadina 20-mer sovrapposti al recettore. La proteina CXCR3 e l’espressione genica sono state testate in linee cellulari epiteliali intestinali e campioni di biopsia umana. L’interazione gliadina-CXCR3 è stata ulteriormente analizzata mediante microscopia a immunofluorescenza, microscopia a cattura laser, reazione a catena della polimerasi di trascrizione inversa in tempo reale e analisi di immunoprecipitazione / Western blot. Esperimenti ex vivo sono stati eseguiti utilizzando l’intestino tenue di topi wild-type C57BL/6 e CXCR3 (-/-) per misurare la permeabilità intestinale e  il rilascio di zonulina   .
  • Esperimenti su colonne di affinità e colocation hanno dimostrato che la gliadina si lega a CXCR3 e che almeno 2 peptidi sintetici di alfa-gliadina da 20 mer sono coinvolti in questo legame. CXCR3 è espresso nell’epitelio intestinale e nella lamina propria del topo e dell’uomo. L’espressione mucosa di CXCR3 era elevata nella celiachia attiva, ma è tornata ai livelli basali dopo l’introduzione di una dieta priva di glutine. La gliadina ha indotto un’associazione fisica tra CXCR3 e MyD88 negli enterociti. La gliadina ha aumentato il rilascio di zonulina  e la permeabilità intestinale nell’intestino tenue dei topi wild-type ma non CXCR3 (- / -).
  • La gliadina si lega a CXCR3 e porta al  rilascio di zonulina dipendente da MyD88   e ad una maggiore permeabilità intestinale.

Gliadina,   zonulina   e permeabilità intestinale: effetti sulla mucosa dell’intestino viscerale e non intestinale e sulle linee cellulari intestinali.

  • Poco si sa sull’interazione della gliadina con le cellule epiteliali intestinali e sui meccanismi di penetrazione della gliadina attraverso la barriera epiteliale intestinale. Abbiamo esaminato se la gliadina avesse un effetto diretto sul  rilascio   e sulla segnalazione di zonulina .
  • Sia l’intestino tenue umano ex vivo che i monostrati cellulari intestinali sono stati esposti alla gliadina e  sono stati monitorati il ​​rilascio di zonulina   e le variazioni della permeabilità paracellulare in presenza e assenza di antagonismo della  zonulina   . Il legame della zonulina, il riarrangiamento del citoscheletro e la ridistribuzione della zonula ocludens-1 (ZO-1) sono stati valutati mediante microscopia a immunofluorescenza. L’espressione dell’occludina della giunzione stretta e l’espressione del gene ZO-1 sono state valutate mediante reazione a catena della polimerasi (PCR) in tempo reale.
  • Dopo l’esposizione alla gliadina, le cellule IEC6 e  Caco2   con un recettore della zonulina hanno rilasciato   zonulina   nel mezzo cellulare, il che ha provocato  il legame della zonulina   alla superficie cellulare, l’alterazione del citoscheletro della cellula, la perdita dell’interazione della proteina occludina-ZO1 e una maggiore permeabilità del monostrato. Il pretrattamento   con   l’antagonista della zonulina FZI/0 ha bloccato questi cambiamenti senza influenzare  il rilascio della zonulina   .
  • Dopo l’esposizione alla gliadina luminale, le biopsie intestinali di pazienti celiaci in remissione hanno mostrato un rilascio prolungato di  zonulina nel lume  e un aumento della permeabilità intestinale che è stata bloccata dal pretrattamento FZI / 0.
  • Al contrario, le biopsie di pazienti non celiaci hanno mostrato un rilascio limitato e transitorio di  zonulina  accompagnato da un aumento della permeabilità intestinale che non ha mai raggiunto il livello di permeabilità osservato nei tessuti della celiachia (CD). L’esposizione cronica alla gliadina ha sottoregolato l’espressione dei geni ZO-1 e occludina.
  • Sulla base dei nostri risultati, abbiamo concluso che la gliadina attiva la  segnalazione della zonulina   indipendentemente dall’espressione genetica dell’autoimmunità, portando a una maggiore permeabilità intestinale delle macromolecole.

Identificazione   della zonulina umana    , un modulatore fisiologico della giunzione stretta, come preaptoglobina-2

  1. L’aumento della permeabilità intestinale (IP) è recentemente emerso come un meccanismo comune alla base della patogenesi di malattie allergiche, infiammatorie e autoimmuni.
  2. La caratterizzazione   della zonulina  , l’unico mediatore fisiologico noto per regolare reversibilmente l’IP, è rimasta sfuggente. Attraverso l’analisi proteomica dei sieri umani  , abbiamo   identificato   la zonulina umana     come precursore dell’aptoglobina-2 (pre-HP2).
  3. Sebbene sia noto che l’HP maturo elimina l’emoglobina libera (Hb) al fine di inibire la sua attività ossidativa, nessuna funzione è mai stata attribuita alla sua forma precursore non scissa. Abbiamo scoperto che la zonulina a catena singola     contiene un motivo simile all’EGF che porta alla transattivazione del recettore dell’EGF (EGFR) mediante l’attivazione del recettore 2 attivato dalla proteinasi  (PAR (2)). L’attivazione di questi 2 recettori è stata associata ad un aumento dell’IP.
  4. Il silenziamento di PAR (2) indotto da SiRNA o l’uso di topi PAR (2) (- / -) ha impedito la perdita dell’integrità della barriera. La scissione proteolitica della   zonulina   nelle subunità alfa (2) e beta ha neutralizzato la sua capacità sia di attivare l’EGFR che di aumentare l’IP.
  5. L’espressione genica quantitativa ha dimostrato che   la zonulina   è sovraespressa nella mucosa intestinale delle persone celiache.
  6. A nostra conoscenza, questo è un primo esempio di molecola che, nella sua forma precursore, esibisce un’attività biologica diversa da quella della sua forma matura. Di conseguenza, i nostri risultati caratterizzano   la zonulina   come un ligando precedentemente non descritto che coinvolge i segnali chiave coinvolti nella patogenesi   delle malattie immuno-mediate umane   che possono essere prese di mira per interventi terapeutici.

 

La zonulina   è una proteina eucariotica strutturalmente simile alla tossina occlusore di Vibrio cholerae. Svolge un ruolo importante nell’apertura delle strette connessioni dell’intestino tenue. 

 

  • La perdita dell’integrità della parete intestinale durante la sepsi può essere critica ed è stata segnalata in vari studi sperimentali e   nell’uomo   . Livelli   elevati di zonulina   possono essere dimostrati in malattie associate a un’aumentata infiammazione intestinale come la celiachia e il diabete di tipo 1. Pertanto, abbiamo studiato il ruolo   dei livelli plasmatici di zonulina  nei pazienti con sepsi come marker non invasivo dell’integrità della parete intestinale.
  • La concentrazione plasmatica   di zonulina  è stata determinata in 25 pazienti con sepsi, sepsi grave o shock settico secondo i criteri ACCP/SCCM il primo giorno della diagnosi di sepsi. 18 pazienti in terapia intensiva postoperatoria non settica e 20 volontari sani sono serviti come controllo. I livelli plasmatici sono stati determinati utilizzando un kit ELISA commerciale. I dati sono riportati come intervallo mediano e interquartile (IQR).
  • Una concentrazione plasmatica   di zonulina significativamente più alta  è stata riscontrata nel gruppo sepsi: 6,61 ng/ml (IQR 3,51-9,46) rispetto al gruppo di controllo postoperatorio: 3,40 ng/ml (IQR 2,14-5,70) (P = 0,025), così come al gruppo sano: 3,55 ng/ml (IQR 3,14-4,14) (P = 0,008)
  • Siamo stati in grado di dimostrare livelli plasmatici elevati  di zonulina  , un potenziale marker di permeabilità intestinale nei pazienti con sepsi. L’aumento della   zonulina   può fungere da meccanismo aggiuntivo per l’aumento della permeabilità intestinale osservata durante la sepsi e la SIRS.

La disfunzione della barriera epiteliale intestinale e l’attivazione immunitaria innata predicono la mortalità nell’infezione da HIV trattata.

  1. Sebbene l’infiammazione preveda la mortalità nell’infezione da virus dell’immunodeficienza umana (HIV) trattata  ,  il  significato prognostico della disfunzione della barriera intestinale e dei marcatori fenotipici delle cellule T rimane poco chiaro.
  2. Abbiamo valutato i fattori prognostici immunologici per la mortalità in uno studio caso-controllo del Longitudinal Study of the Ocular Complications of AIDS (LSOCA) utilizzando la regressione logistica condizionale. Ciascuno dei 64 pazienti deceduti entro 12 mesi dalla soppressione virale mediata dal trattamento è stato confrontato con 2 controlli (controlli totali, 128) per durata della soppressione virale mediata dalla terapia antiretrovirale, conta dei linfociti T CD4 al nadir (+), età, sesso, e precedente retinite da CMV. Un’analisi secondaria simile è stata eseguita nella coorte SCOPE, che includeva partecipanti con immunodeficienza meno grave.
  3. Marcatori di integrità della barriera epiteliale plasmatica intestinale (livello di proteina legante gli acidi grassi intestinali e livello di zonulina-1), livello di CD14 solubile, rapporto chinurenina/triptofano, livello di recettore 1 del fattore di necrosi tumorale solubile, livello e livello di proteina C-reattiva altamente sensibile D-dimero tutta la mortalità altamente prevista, anche se corretta per la conta prossimale dei linfociti T CD4 (+) (tutti P ≤ 0,001). Una percentuale maggiore di cellule CD38 (+) HLA-DR (+) nella popolazione di cellule T CD8 (+) era un predittore di mortalità prima (P = 0,031) ma non dopo (P = 0,10) aggiustamento per CD4 prossimale (+) Numero di cellule T. L’incidenza di cellule senescenti (definite come cellule CD28 (-) CD57 (+), impoverite (definite come cellule PD1 (+)), cellule naive e specifiche per CMV non prediceva la mortalità.

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E01Z0004-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

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EKC36091-48T Biomatik Corporation 48T 535.99 EUR

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Human (Zonulin) Elisa Kit

EK710802 AFG Bioscience LLC 96 Wells 0.12 EUR

Human zonulin ELISA kit

CSB-EQ027649HU-24T Cusabio 1 plate of 24 wells 198 EUR

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1-CSB-EQ027649HU Cusabio
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Human Zonulin ELISA Kit

NSL1518Hu Sunlong 96 wells 468 EUR

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SL2712Hu Sunlong 96 Tests 468 EUR

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E-EL-H5560-24Tests Elabscience Biotech 24 Tests 150 EUR

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E-EL-H5560-96Tests10 Elabscience Biotech 96 Tests *10 6090 EUR

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Human zonulin ELISA Kit

MBS706368-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 5575 EUR

Human zonulin ELISA Kit

MBS706368-24StripWellsLIMIT1 MyBiosource 24-Strip-Wells(LIMIT1) 275 EUR

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MBS706368-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 545 EUR

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MBS706368-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 2920 EUR

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MBS706368-96StripWells MyBiosource 96-Strip-Wells 765 EUR

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MBS167049-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 3460 EUR

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MBS167049-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 285 EUR

Human zonulin ELISA Kit

MBS167049-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 1750 EUR

Human zonulin ELISA Kit

MBS167049-96StripWells MyBiosource 96-Strip-Wells 425 EUR

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MBS2568038-10x96Tests MyBiosource 10x96Tests 4215 EUR

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MBS2568038-24Tests MyBiosource 24Tests 270 EUR

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MBS2568038-48Test MyBiosource 48Test 470 EUR

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MBS2568038-96Tests MyBiosource 96Tests 555 EUR

Human Zonulin ELISA Kit

MBS3802140-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 6725 EUR

Human Zonulin ELISA Kit

MBS3802140-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 550 EUR

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MBS3802140-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 3420 EUR

Human Zonulin ELISA Kit

MBS3802140-96StripWells MyBiosource 96-Strip-Wells 765 EUR

Human Zonulin ELISA Kit

EIA06575h Enlibio each 430 EUR

Human zonulin,HP ELISA KIT

E3704Hu-1096T Jiaxing Korain Biotech Ltd (BT Labs) 10*96T 4122 EUR

Human zonulin,HP ELISA KIT

E3704Hu-48wells Jiaxing Korain Biotech Ltd (BT Labs) 48 wells 300 EUR

Human zonulin,HP ELISA KIT

E3704Hu-596T Jiaxing Korain Biotech Ltd (BT Labs) 5*96T 2061 EUR

Human zonulin,HP ELISA KIT

E3704Hu-96wells Jiaxing Korain Biotech Ltd (BT Labs) 96 wells 458 EUR

ELISA kit for Human Zonulin

E-EL-H5560 Elabscience Biotech 1 plate of 96 wells 640.8 EUR

Human Zonulin (ZUN) ELISA Kit

MBS9353501-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 6725 EUR

Human Zonulin (ZUN) ELISA Kit

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Human Zonulin (ZUN) ELISA Kit

MBS9353501-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 3420 EUR

Human Zonulin (ZUN) ELISA Kit

MBS9353501-96StripWells MyBiosource 96-Strip-Wells 765 EUR

Human Zonulin Antibody ELISA Kit

MBS3804985-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 6725 EUR

Human Zonulin Antibody ELISA Kit

MBS3804985-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 550 EUR

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MBS3804985-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 3420 EUR

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Haptoglobin/Zonulin Human ELISA Kit

MBS355879-5x96Tests MyBiosource 5x96Tests 2280 EUR

Haptoglobin/Zonulin Human ELISA Kit

MBS355879-96Tests MyBiosource 96Tests 505 EUR

Human Zonulin IgA (HP IgA) ELISA Kit

abx055944-100g Abbexa 100 µg Ask for price

Human Zonulin IgA (HP IgA) ELISA Kit

abx055944-10g Abbexa 10 µg 493.75 EUR

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Human Zonulin IgM (HP IgM) ELISA Kit

abx055946-100g Abbexa 100 µg Ask for price

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Human Zonulin / Haptoglobin (HP) ELISA Kit

abx050274-96tests Abbexa 96 tests 801.6 EUR

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abx354901-96tests Abbexa 96 tests 943.2 EUR

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Rat zonulin ELISA kit

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E02Z0004-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

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E07Z0004-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

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NSL1141r Sunlong 96 Tests 498 EUR

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QY-E11736 Qayee Biotechnology 96T 448.8 EUR

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SL1316Ra Sunlong - 498 EUR

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MBS2606662-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 3290 EUR

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Goat zonulin ELISA kit

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MBS2608453-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 310 EUR

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E03Z0004-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

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E03Z0004-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

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NSL1200m Sunlong 96 Test 528 EUR

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Rabbit zonulin ELISA kit

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Bovine (Zonulin)ELISA Kit

EK760889 AFG Bioscience LLC 96 Wells 0.1 EUR

Bovine Zonulin ELISA Kit

NSL1051Bo Sunlong 96 T 528 EUR

Canine Zonulin ELISA Kit

NSL2069Ca Sunlong 2164 wells 528 EUR

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Rabbit Zonulin ELISA Kit

MBS2606873-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 3545 EUR

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MBS2606873-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 310 EUR

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Porcine Zonulin ELISA Kit

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Chicken Zonulin ELISA Kit

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SL0219Ch Sunlong - Ask for price

Porcine Zonulin ELISA Kit

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Human Haptoglobin;zonulin,Hpt;HP ELISA KIT

E1117Hu-1096T Jiaxing Korain Biotech Ltd (BT Labs) 10*96T 4122 EUR

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Simian HP(Zonulin) ELISA Kit

ELK0733-48T ELK Biotech 48T Ask for price

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Human Haptoglobin (zonulin) ELISA kit 96 tests, Quantitative

6250-80 Alpha Diagnostics 1 Kit 927.6 EUR

Guinea pig zonulin ELISA kit

E05Z0004-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

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Guinea pig Zonulin ELISA Kit

MBS2605555-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 3545 EUR

Guinea pig Zonulin ELISA Kit

MBS2605555-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 310 EUR

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Rat Haptoglobin/zonulin ELISA Kit

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La disfunzione della barriera epiteliale intestinale, l’attivazione immunitaria innata, l’infiammazione e la coagulazione, ma non l’attivazione, l’invecchiamento e l’esaurimento dei linfociti T, predicono in modo indipendente la mortalità nei soggetti HIV-positivi trattati con una storia di AIDS e sono obiettivi realistici per l’intervento.

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