Studio quantitativo di Golgi della morfologia dendritica nei neuroni spinosi medi dello striato di topo.

  • In questo studio, abbiamo fornito un’analisi morfologica quantitativa dettagliata dei neuroni spinosi medi (MSN) nello striato dorsale dei topi e determinato l’accordo di valori tra i tre gruppi di animali ottenuti in diversi set di esperimenti. Gli alberi dendritici di 162 apparati Golgi Cox (  FD   Rapid   GolgiStain   Kit  ) impregnati con MSN da 15 topi adulti C57BL / 6 sono stati ricostruiti tridimensionalmente con il software Neurolucida e i parametri della morfologia dendritica sono stati confrontati tra i gruppi sperimentali.
  • I parametri della lunghezza della ramificazione e del modello di ramificazione non hanno mostrato differenze statisticamente significative ed erano altamente coerenti tra i gruppi. L’area media del soma neuronale variava da 160 μm2 a 180 μm2 e le cellule avevano 5-6 dendriti primari  con quasi 40 segmenti per neurone. L’analisi di Sholl ha confermato la regolarità dei rami dendritici.
  • La lunghezza totale dei dendriti era di circa 2100 µm, con una lunghezza media dei rami individuali (intermedi) di circa 22 µm e degli arti finali di circa 100 µm.
  •  Sebbene ogni gruppo sperimentale abbia seguito lo stesso rigoroso protocollo per la preparazione dei tessuti e la colorazione del Golgi, abbiamo riscontrato un’incoerenza nel volume del dendrite e nella superficie del soma.
  • Tali modifiche avrebbero potuto essere influenzate metodologicamente durante la procedura del Golgi, pur senza intaccare la lunghezza dei dendriti e la complessità dell’albero.
  • Poiché l’attività neuronale influenza lo spessore dei dendriti, non si può escludere che l’incoerenza di volume osservata fosse correlata agli stati funzionali dei neuroni prima del sacrificio degli animali.
  • Le analisi complete della complessità degli alberi e delle lunghezze dei dendriti fornite qui possono servire come strumento aggiuntivo per comprendere la variabilità morfologica nella popolazione più abbondante di neuroni striatali.
  • Come parametri di riferimento, possono costituire la base per il confronto con i risultati ottenuti in studi che utilizzano diversi modelli di topi geneticamente modificati per spiegare le diverse condizioni patologiche in cui sono presenti MSN.

Metodo Golgi-Cox modificato e altamente sensibile per l’impregnazione completa e stabile dei neuroni embrionali.

Il   kit FD   Rapid   GolgiStain     (  FD   NeuroTechnologies, Inc., Ellicott City, MD) è stato sviluppato utilizzando un metodo di impregnazione Golgi-Cox migliorato per fornire una colorazione stabile, sensibile e confortevole dei neuroni maturi. Tuttavia, questo metodo non può visualizzare chiaramente i neuroni embrionali. Abbiamo ulteriormente migliorato il metodo Golgi-Cox introducendo un ulteriore passaggio di legame dell’aldeide prima dell’impregnazione; in questo modo possiamo fertilizzare stabilmente e sufficientemente i neuroni del cervello fetale in modo che siano visibili anche i delicati rami degli alberi dendritici.

Misurazione con sonda fluorescente del pH intrasosomiale in cellule viventi e del disturbo del pH dovuto a vari fattori.

  1. Viene descritto un metodo quantitativo per misurare il pH intrasosomiale nelle cellule viventi. Il destrano marcato con isotiocianato di fluoresceina (  FD  ) viene endocitosi e accumulato nei lisosomi, dove rimane senza apparente degradazione. Lo spettro di fluorescenza di questo composto cambia con il pH nell’intervallo 4-7 e non è seriamente influenzato  dalla concentrazione di FD   , dalla forza ionica o dalla concentrazione di proteine.
  2. Le cellule vitali sui vetrini coprioggetto sono poste in una cella spettrofluorimetrica e possono essere perfuse con vari mezzi. Il pH normale all’interno dei lisosomi dei macrofagi sembra essere 4,7-4,8, sebbene possa scendere temporaneamente a 4,5.
  3. L’esposizione delle cellule a varie basi deboli e ionofori acidi di potassio provoca un aumento del pH.
  4. Le variazioni del pH sono molto   più veloci  dell’accumulo intralisosomiale di basi deboli. Gli inibitori della glicolisi (2-deossiglucosio) e della fosforilazione ossidativa (cianuro o azide) aggiunti insieme, ma non separatamente, aumentano il pH intralisosomiale. Questi risultati forniscono prove di un meccanismo di accumulo di protoni attivo nella membrana lisosomiale e supportano la teoria dell’accumulo di basi deboli nei lisosomi mediante intrappolamento di protoni.

Colorazione Golgi-Cox di dendriti neuronali e spine dendritiche con il kit FD Rapid GolgiStain.

Il metodo Golgi-Cox è una delle tecniche più efficaci per lo studio della morfologia dei dendriti neuronali e delle spine dendritiche. Tuttavia, l’affidabilità e il lungo processo di colorazione di Golgi-Cox sono stati i principali ostacoli all’uso diffuso di questa tecnica.

Per superare  queste carenze e promuovere questa preziosa tecnica, abbiamo sviluppato il  kit FD   Rapid   GolgiStain    basato sul principio dei metodi descritti da Ramón-Moliner nel 1970 e Glaser e Van der Loos nel 1981. Il   kit   migliora e semplifica notevolmente il Golgi-Cox Tecnica.

Questo   kit  è affidabile per visualizzare i dettagli morfologici dei neuroni, consentendo l’analisi di vari parametri della morfologia dendritica, come la lunghezza e il modello dei rami dendritici e il numero, la forma e la dimensione delle spine dendritiche, sia nel cervello animale che dopo quello umano Morte. È disponibile un video tutorial di 40 minuti sul congelamento, la criosezione e la colorazione dei tessuti.

Sviluppo di un protocollo ottimizzato per il metodo di microscopia elettronica di Golgi basato sulla procedura di colorazione di Golgi-Cox utilizzando un   kit commerciale  .

  • L’introduzione del   kit FD   Rapid   GolgiStain ha    permesso a molti ricercatori di studiare facilmente la morfologia dei neuroni.
  • Grazie al metodo di impregnazione Golgi-Cox migliorato,   con questo kit  è possibile ottenere immagini colorate di neuroni stabili e altamente sensibili .
  • Per analizzare  in dettaglio microstrutture come spine dendritiche e coni di crescita, abbiamo cercato di creare un metodo utile che combina la colorazione di Golgi-Cox e la microscopia elettronica (metodo Golgi-EM) in modo che i  campioni colorati del kit preparati  siano adatti per l’uso in microscopia elettronica ( EM) ricerca.
  • I risultati di questo studio suggeriscono l’importanza della fase di legame della glutaraldeide nel metodo Golgi-EM.
  • Qui presentiamo il protocollo consigliato per il metodo Golgi-EM che è disponibile per la microscopia elettronica ad altissima tensione e la microscopia elettronica a trasmissione.
  • Siamo convinti che il nostro metodo Golgi-EM potrebbe diventare un metodo affidabile e valido che potrebbe contribuire a nuove scoperte nella morfologia neuronale.
  • Colorazione della glia coerente e riproducibile con il metodo Golgi-Cox modificato.

La colorazione di Golgi-Cox è un potente approccio istochimico ampiamente utilizzato per visualizzare la morfologia dei neuroni e della glia.

Tuttavia, il suo utilizzo come metodo di prima scelta è ostacolato dalla sua natura precaria, dalla consistenza ridotta e dai lunghi tempi di tintura. Il  kit FD   Rapid   GolgiStain    (  FD   Neurotechnologies, Inc., USA) è stato sviluppato utilizzando l’approccio Golgi-Cox. È un modo semplice, affidabile e riproducibile di impregnare l’apparato di Golgi per l’analisi della morfologia neuronale.
Ecco semplici modifiche al protocollo del produttore che consentono la colorazione riproducibile e affidabile delle cellule gliali.
Esposizione del tessuto cerebrale al 4% di paraformaldeide (PFA) durante la perfusione seguita da fissazione con  glutaraldeide all’8% in PFA al 4% solo cellule gliali colorate, mentre in assenza di fissazione sia i neuroni che gliali colorati con morfologia poco chiara. Inoltre, abbiamo scoperto che l’impregnazione a 26°C ± 1 era fondamentale per ottenere un colore uniforme.

FD Hematoxylin Solution™ (double strength)

PS104-2 FD Neurotechnologies 500 ml 310.8 EUR

FD Luxol Fast Blue Solution™

PS109 FD Neurotechnologies 500 ml 298.8 EUR

FD Cresyl Violet Solution™ (regular strength)

PS102-1 FD Neurotechnologies 500 ml 223.2 EUR

FD Cresyl Violet Solution™ (double strength)

PS102-2 FD Neurotechnologies 500 ml 278.4 EUR

FD Eosin Y Solution™ (regular strength)

PS103-1 FD Neurotechnologies 500 ml 182.4 EUR

FD Eosin Y Solution™ (double strength)

PS103-2 FD Neurotechnologies 500 ml 232.8 EUR

FD Methyl Green Solution™ (regular strength)

PS105-1 FD Neurotechnologies 500 ml 216 EUR

FD Methyl Green Solution™ (double strength)

PS105-2 FD Neurotechnologies 500 ml 270 EUR

FD Neutral Red Solution™ (regular strength)

PS106-1 FD Neurotechnologies 500 ml 219.6 EUR

FD Neutral Red Solution™ (double strength)

PS106-2 FD Neurotechnologies 500 ml 273.6 EUR

FD Azure II Solution™ (regular strength)

PS107-1 FD Neurotechnologies 500 ml Ask for price

FD Azure II Solution™ (double strength)

PS107-2 FD Neurotechnologies 500 ml Ask for price

Gold Seal Rite-On® frosted slides

PO104 FD Neurotechnologies box (72 slides) 108 EUR

Section incubation carrier kit for 6 wells

PO304 FD Neurotechnologies each 127.2 EUR

Section incubation carrier kit for 12 wells

PO305 FD Neurotechnologies each 127.2 EUR

0.1 M Phosphate Buffer, pH 7.4

PB101 FD Neurotechnologies 1L 114 EUR

20% sucrose (in 0.1 M phosphate buffer, pH 7.4)

PB201 FD Neurotechnologies 1L 135.6 EUR

Mouse EmbryoSections, fixed/paraffin, 10 slides

PE102 FD Neurotechnologies each Ask for price

Rat EmbryoSections, fixed/paraffin, 10 slides

PE202 FD Neurotechnologies each Ask for price

Phosphate-Buffered 4% Paraformaldehyde

PF101 FD Neurotechnologies 1 L 153.6 EUR

EmbryoFix™

PF102 FD Neurotechnologies 20 ml 66 EUR

Phosphate-Buffered 4% Paraformaldehyde with picric acid

PF103 FD Neurotechnologies 1 L 177.6 EUR

Gelatin-coated microscope slides (75 x 25 mm)

PO101 FD Neurotechnologies 100 slides 236.4 EUR

Proteinase-resistant microscope slides

PO102 FD Neurotechnologies 100 slides 236.4 EUR

Superfrost® Plus microscope slides

PO103 FD Neurotechnologies box (72 slides) 123.6 EUR

Gelatin-coated microscope slides (75 x 50 mm)

PO105 FD Neurotechnologies 100 slides 420 EUR

100-place microscope slide box (for 75 x 25 mm slides)

PO201 FD Neurotechnologies each 84 EUR

25-place microscope slide box (for 75 x 25 mm slides)

PO202 FD Neurotechnologies each 73.2 EUR

100-place microscope slide box (for 75 x 50 mm slides)

PO203 FD Neurotechnologies each 152.4 EUR

Section incubation plate with 6 inserts

PO301 FD Neurotechnologies each 168 EUR

Section incubation plate with 12 inserts

PO302 FD Neurotechnologies each 216 EUR

Section incubation tray (black or white)

PO303 FD Neurotechnologies each 64.8 EUR

Fine natural hair brush for mounting sections

PO501 FD Neurotechnologies each 80.4 EUR

Aflatoxin Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092054-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092043-50tests Abbexa 50 tests 410.4 EUR

Quinolones Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092046-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092040-50tests Abbexa 50 tests 326.4 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092042-50tests Abbexa 50 tests 360 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092051-50tests Abbexa 50 tests 493.2 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092056-50tests Abbexa 50 tests 510 EUR

Rapid Transformation Kit

0156 AthenaES Kit 119.4 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092047-50tests Abbexa 50 tests 661.2 EUR

Tetracycline Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092048-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Deoxynivalenol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092052-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Deoxynivalenol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092053-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Rapid Stain CBB Kit

30035-14 NACALAI TESQUE 1SET 66.5 EUR

Rapid RCA Assay Kit

VPK-111 Cell Biolabs 30 assays 465 EUR

Rapid RCA Assay Kit

VPK-111-5 Cell Biolabs 5 x 30 assays 2025 EUR

Lead Rapid Test Kit

700001 Ring Biotechnology Co 96T 200 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092045-50tests Abbexa 50 tests 427.2 EUR

Aflatoxin B1 Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092050-50tests Abbexa 50 tests 444 EUR

Aflatoxin B1 Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092055-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Rapid PTAH Stain Kit

25715-250 Polysciences Europe GmbH 250mlkit 265 EUR

Rapid PTAH Stain Kit

25715-500 Polysciences Europe GmbH 500mlkit 381 EUR

Rapid CBB Destain Kit

30046-74 NACALAI TESQUE 1SET 68.6 EUR

Estriol Rapid Test Kit

100058 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Melamine Rapid Test Kit

abx092011-50tests Abbexa 50 tests 444 EUR

Melamine Rapid Test Kit

abx092011-100l Abbexa 100 µl 175 EUR

Melamine Rapid Test Kit

abx092011-1ml Abbexa 1 ml 437.5 EUR

Melamine Rapid Test Kit

abx092011-200l Abbexa 200 µl 287.5 EUR

Caffeine Rapid Test Kit

abx092240-100l Abbexa 100 µl 387.5 EUR

Caffeine Rapid Test Kit

abx092240-1ml Abbexa 1 ml 3600 EUR

Caffeine Rapid Test Kit

abx092240-200l Abbexa 200 µl 1050 EUR

Neomycin Rapid Test Kit

100010 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Colistin Rapid Test Kit

100026 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Flunixin Rapid Test Kit

100028 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Melamine Rapid Test Kit

400002 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Paraquat Rapid Test Kit

N002 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Carbaryl Rapid Test Kit

N007 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Fipronil Rapid Test Kit

N013 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Malachite Green Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092041-10tests Abbexa 10 tests 360 EUR

Estradiol Rapid Test Kit

100055 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Natamycin Rapid Test Kit

101305 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Cefalexin Rapid Test Kit

E1012 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit

abx092043-100l Abbexa 100 µl 175 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit

abx092043-1ml Abbexa 1 ml 400 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit

abx092043-200l Abbexa 200 µl 262.5 EUR

Adenovirus Rapid Test Kit

abx092253-100l Abbexa 100 µl 1925 EUR

Adenovirus Rapid Test Kit

abx092253-1ml Abbexa 1 ml 26250 EUR

Adenovirus Rapid Test Kit

abx092253-200l Abbexa 200 µl 6600 EUR

Lincomycin Rapid Test Kit

100005 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Gentamicin Rapid Test Kit

100011 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Spiramycin Rapid Test Kit

100031 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Avermectin Rapid Test Kit

100045 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Bacitracin Rapid Test Kit

100046 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit

100061 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Olaquindox Rapid Test Kit

100062 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Metamizole Rapid Test Kit

100064 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Pirlimycin Rapid Test Kit

100066 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Macrolides Rapid Test Kit

100323 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR

Albendazol Rapid Test Kit

300001 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Cyromazine Rapid Test Kit

N006 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Carbofuran Rapid Test Kit

N010 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Quinolones Rapid Test Kit Kit

100309 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit

abx092040-100l Abbexa 100 µl 150 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit

abx092040-1ml Abbexa 1 ml 337.5 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit

abx092040-200l Abbexa 200 µl 225 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit

abx092042-100l Abbexa 100 µl 150 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit

abx092042-1ml Abbexa 1 ml 337.5 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit

abx092042-200l Abbexa 200 µl 225 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit

abx092051-100l Abbexa 100 µl 187.5 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit

abx092051-1ml Abbexa 1 ml 487.5 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit

abx092051-200l Abbexa 200 µl 325 EUR

Florfenicol Rapid Test Kit

100032 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit

100059 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit

100060 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Carbendazim Rapid Test Kit

100334 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR

Acetamiprid Rapid Test Kit

100335 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR

Florfenicol Rapid Test Kit

E1020 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Carbendazim Rapid Test Kit

N001 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Acetamiprid Rapid Test Kit

N004 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

BlastR Rapid Filtration Kit

BLR02 Cytoskeleton 50 purifications 154.96 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit

abx092047-100l Abbexa 100 µl 287.5 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit

abx092047-1ml Abbexa 1 ml 625 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit

abx092047-200l Abbexa 200 µl 450 EUR

Tetracycline Rapid Test Kit

abx092048-100l Abbexa 100 µl 250 EUR

Tetracycline Rapid Test Kit

abx092048-1ml Abbexa 1 ml 562.5 EUR

Tetracycline Rapid Test Kit

abx092048-200l Abbexa 200 µl 375 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit

100008 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Streptomycin Rapid Test Kit

100012 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Progesterone Rapid Test Kit

100047 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Erythromycin Rapid Test Kit

100065 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Trimethoprim Rapid Test Kit

100070 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Progesterone Rapid Test Kit

102205 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit

E1014 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Imidacloprid Rapid Test Kit

N005 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Thiamethoxam Rapid Test Kit

N008 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

AIV Ab Rapid Test Kit

T20191 Ring Biotechnology Co 20T 60 EUR

PCV Ab Rapid Test Kit

T30051 Ring Biotechnology Co 20T 60 EUR

*Rapid HiEnterococci Test Kit

K017-1KT EWC Diagnostics 1 unit 5.03 EUR

Tetracyclines Rapid Test Kit

100006 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Dexamethasone Rapid Test Kit

100044 Ring Biotechnology Co 96T 85 EUR

Betamethasone Rapid Test Kit

100067 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Tetracyclines Rapid Test Kit

100307 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR

Cefalosporins Rapid Test Kit

E1011 Ring Biotechnology Co 96T 120 EUR

Metronidazole Rapid Test Kit

E1025 Ring Biotechnology Co 72T 200 EUR

LYME Ab Rapid Test Kit

HG035 EnoGene 10 Tests/Kit 16.1 EUR

PRRS Ab Rapid Test Kit

T30021 Ring Biotechnology Co 20T 60 EUR

BVDV Ab Rapid Test Kit

T40131 Ring Biotechnology Co 20T 60 EUR

BVDV Ag Rapid Test Kit

T41131 Ring Biotechnology Co 20T 60 EUR

Chlorothalonil Rapid Test Kit

N003 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Dermatophytosis Rapid Test Kit

C10901 Ring Biotechnology Co 10T Ask for price

Chloramphenicol Rapid Test Kit

abx092045-100l Abbexa 100 µl 175 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit

abx092045-1ml Abbexa 1 ml 412.5 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit

abx092045-200l Abbexa 200 µl 275 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit

100014 Ring Biotechnology Co 96T 100 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit

100314 Ring Biotechnology Co 48T 90 EUR
Il nostro approccio Golgi-Cox modificato è coerente e riproducibile e garantisce una colorazione uniforme della glia in tutto il cervello.
Poiché questo protocollo colora solo una piccola percentuale di cellule, è adatto per l’analisi a cellula singola.

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